H9N2亚型猪流感病毒血凝素重组蛋白在LAT诊断方法与应用.pdfVIP

‘87’ 2012年第六届南京农业大学畜牧兽医学术年会论文集 —————————————————————————————————————————一 H9N2亚型猪流感病毒血凝素重组蛋白 在LAT诊断方法中的应用 张瑞华1，刘 珍2，郑雪花1，李春红1， 李寸欣1，金梅林3，陈焕春3 (1．河北北方学院动物科技学院动物医学系，河北张家||075131 2鄂尔多斯市动物卫生监督所，内蒙古鄂尔多斯017000； 3华中农业大学动物医学院动物病毒室．湖北武汉430070) 摘要：利用原核表达的H9亚型猪流感病毒m凝素蛋白做为抗原，建立了检测H9亚型猪流感病毒抗体的乳胶凝集试验方法。阳性重组质粒 pGEX—HA转化大肠杆菌BL21获得了原核表达，表达的血凝素蛋白位于包涵体中，包涵体经变性、复性处理，利用复性产物作为抗原，经碳二亚 胺(EDAC)将表达产物和羧基化的乳胶共价偶联，建立了该LAT检测方法。结果表明应用HA重组蛋白作为诊断抗原建立的检测方法具有特异 性强、敏感性高、重复性好的特点，可用于1t9亚型猪流感抗体水平监测、流行病学调查和现地疫病普查。 关键词：猪流感病毒；血凝素蛋白；LAT 蛋白建立了一种H9亚型猪流感病毒抗体的乳胶凝集 猪流感(Swineinfluenza，SI)是由猪流感病毒 influenza 试验的检测方法，该方法快速、灵敏、准确、简便， (Swine virus，SIV)引起的一种急性、传染 性呼吸道疾病，其临床上以突发、高热、咳嗽、呼吸 可用于H9亚型猪流感抗体水平监测和流行病学 困难、衰竭和死亡为特征。1918年美国首先报道了调查。 该病，目前该病已蔓延至世界上大部分国家和地区， 1材料与方法 猪流感被认为是集约化养猪场普遍存在且难以根除的 猪呼吸道疾病之一，主要使患病猪的生产性能下降， 1．1菌种、质粒及相关试剂 E．coli 同时猪感染SIV后会导致其他细菌和病毒的感染，给 BL21由本室保存提供。含有H9亚型猪流 畜牧业造成巨大的经济损失。除此之外，人类感染 SIV在美国、欧洲和新西兰均有文献报道，甚至可导 4．5的PBS 致发病和死亡。我国人群也曾遭受SIV侵袭。1998司产品，一20℃保存。2％碳二亚胺为pH 年香港在猪群中首次分离到猪H9N2亚型流感毒株：配制而成、乳胶直径为0．7¨m的羧化聚苯乙烯乳 2002年哈尔滨兽医研究所在我国的辽宁、广东、山胶，4℃保存。 东和重庆分离到猪H9N2亚型毒株，并证实其成为引1．2血清和酶标抗体 起猪流感的重要毒株之一。同年在我国的福建省也分 H1和H3亚型猪流感病毒抗体阳性血清，猪繁 离到猪H9N2亚型病毒。以上研究表明H9N2一SIV在 我国猪群中存在已较为普遍。猪作为流感病毒种间传 阳性血清由本实验室保存。阴性血清来自未免疫过猪 播的中间宿主，在流感病毒的流行病学中占据举足轻 流感疫苗、无临床症状的健康猪血清，同时经HI试 重的地位，因此开展猪流感的研究具有重要的公共卫 验检测为猪流感阴性；辣根过氧化物酶(HRP)标 生学意义。 记的兔抗猪IgG购自Sigma公司，其他试剂均为分析 猪流感病毒属于正黏病毒科甲型流感病毒属，其 纯产品。 基因组为分节段单股负链