应用PCR技术鉴定奶牛胚胎性别的研究.pdfVIP

维普资讯 《黑龙江畜牧兽医)2007年第 12期 29 翮 R接 鉴定奶牛睡胎性 研究 刘俊平 一，刘凤军 ，赵 雪 ，王勇胜 ，张志平 ，安志兴 ，张 涌 (1．西北农林科技大学 生物工程研究所，陕西 杨陵712100； 2．内蒙古农业大学 动物科学与医学学院，内蒙古 呼和浩特010018) 中图分类号：$814．7 文献标识码：B 文章编号：1004—7034(2007)12—0029—03 目前胚胎性别鉴定方法很多，已经报道 的方法 体外胚胎：牛卵巢采于西安某屠宰场 ，采集的卵 有：进行染色体核型分析的细胞遗传学方法；H—Y 巢置采集液 (20～30oC)中，3～4h内运到实验室。 抗血清识别胚胎表面H—Y抗原的免疫学方法；利用 采集卵丘卵母细胞复合体 (COCs)，用洗卵液洗涤 Y染色体片段制作核酸探针的杂交法等。这些方法 3次，放入预先平衡的成熟液 中，置于 38．5oC、5％ 由于都有准确率不高、费时，或不适于应用到实际生 CO、饱和湿度下培养 22～24h，使 卵母细胞成熟。 产中等缺点而难 以推广。进入 2O世纪8O年代后， 用普通精液和性控精液对经过成熟的COCs进行体 SRY基因的发现及 PCR技术的应用 ，为性别鉴定提 外受精，经体外培养后评估胚胎质量，然后鉴定或移 供了新的思路。胚胎性别鉴定的实质就是检测 Y染 植。 色体上的SRY基因，SRY基因是Y染色体上的一个 1．1．1 体 内胚胎的生产和性别鉴定前的处理 胚胎 核心序列为250bp、编码8O个氨基酸的单拷贝基因。 获取：激素处理供体母牛，进行超数排卵，人工授精， Herr等首先采用PCR技术扩增 Y多重复序列鉴定了 在受精后的第 7天非手术冲胚。胚胎的收集评定：实 牛、羊等家畜胚胎性别，其鉴定准确率接近 100％。 体显微镜下检胚，检出的胚胎用 PBS液冲洗 3遍，在 本研究的目的是应用 PCR技术对牛体 内胚胎和 培养液中评定级别。胚胎的切割：收集的胚胎置于 体外胚胎的性别进行鉴定，以检测普通精液和性控精 PBS液滴 中，每个液滴中放 1枚。用简易切割仪切取 液生产胚胎的性别分布 比例 ，在此基础上进一步检测 大约 1O个左右胚胎细胞作为样 品并编号 ，用 PBS液 体 内胚胎和体外胚胎移植受体母牛后的妊娠率 。对 洗 3次，剩下的胚胎部分置于提前编好号码(号码与 奶牛性别控制技术的完善进行探索，特别是为体外生 切割样 品的号码一致)的培养液 中，置于培养箱 中培 产性别控制胚胎的实际应用奠定基础。 养，等鉴定结果出来后移植或冷冻保存。 1 材料与方法 1．1．2 体外胚胎的生产和性别鉴定前的处理 用普 1．1 精液和胚胎 通精液和性控精液分别与体外成熟的卵母细胞进行 普通精液：冷冻精液(0．5mL)在 39℃水浴 中解 体外受精，取受精后 7～8天的桑／囊胚作为样品进行 冻后，置于经平衡的 Percoll液 中，400g离心 5～ 性别鉴定，等鉴定结果出来后移植或冷冻保存。胚胎 40min后，弃掉上清液，底部精子 团用 5mLSP— 取样方法同 1．1．1。 TALP液稀释，100g离心 10min，洗涤 2次并调整精 1．2 牛基因组 DNA的提取 子浓度。 ①将冷冻 的血样在室温水浴 中溶解。②取 性控精液：购 自内蒙古某生物科技有限责任公司