血浆置换对慢性重型乙肝患者血浆蛋白质组影响初步研究.pdfVIP

参评青年优秀论文 179 血浆置换对慢性重型乙肝患者血浆蛋白质组影响的初步研究 欧 强， 殷科珊， 彭 霞， 陈 良， 张丽军 上海市公共卫生临床中心感染科，上海201508 摘要：目的探讨慢性重型乙肝血浆置换(PE)治疗前后的血浆蛋白质组变化，为研究PE治疗重型肝炎的作用机制及 寻找治疗靶标提供新的线索。方法 收集慢性重型乙肝患者PE前后血浆各15份，去除血浆中高丰度蛋白质。应用双向凝胶 电泳(2一DE)技术构建两组研究对象血浆蛋白2一DE图谱，经ImageMaster差异分析软件进行分析，寻找差异蛋白质点。用电 喷雾离子串联质谱(ES卜MS／Ms)对重要的差异蛋白质点进行鉴定。结果经过样品预处理后，血浆中白蛋白和免疫球蛋白 factor 3倍以上的差异蛋白质点15个，鉴定了5个差异蛋白质，其中在PE后血浆中上调的蛋白质有补体因子B(complement B betachain precursor，CFB，点1)、CD5antigen-like蛋白(CD5antigen．1ikeprecursor，点2)、纤维蛋白原B链(Fibdnogellprecur_ sor，FlGB，点3)、触珠蛋白(}laptoglobinprecursor，点4)，下调的蛋白质有载脂蛋白E(Ap0-E，点5)。结论鉴定了5个PE治疗 前后差异表达的蛋白质。这些蛋白表达的改变提示PE可以干预机体脂蛋白代谢、蛋白质分解合成代谢。并能调节机体免疫功能。 补体旁路活化途径等。深入研究这些蛋白质结构和功能对于进一步揭示PE的治疗作用机制具有重要的临床意义。 关键词：慢性重型乙肝；血浆置换； 蛋白质组； 双向凝胶电泳； 质谱 慢性重型肝炎预后极差，单纯内科药物治疗病死率高达60％～70％。以血液净化技术为基础的人工肝支 持系统的出现开辟了重型肝炎治疗的新途径，大大降低了病死率，是目前治疗重型肝炎的一种重要组成部分。 肝脏是机体解毒、生物合成、生物转化的重要器官。慢性重型肝炎时，肝细胞大部分变性、坏死，必然造 成严重的蛋白合成障碍、代谢紊乱以及有毒物质的积聚，表现为血浆中的蛋白质和多肽发生明显改变。我们 运用差异蛋白质组学技术对比分析了慢性重型乙肝患者血浆置换(plasma 表达差异，以期探讨PE对慢性重型乙肝患者血浆中蛋白质的影响，从而进一步揭示血浆置换治疗慢性重型 乙肝的作用机制。 材料与方法 一、研究对象 龄21～48岁，诊断符合2000年西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》诊断分型标准。15例患者均接受 2400 r／min离心5 min后，分装到硅烷化EP管中，一80℃保存备用。 二、实验材料 标准购于上海伯奥生物制品公司。 三、主要仪器 参评青年优秀论文 二维凝胶电泳系统、分光光虚i|、扫描仪、1ma非Ma¨er2D胶分析软件购自GE公司{ProtemII垂直平 HCT，Bruker公司)。 口、血浆样品制备 实验中各组每例样品分别取1(10pI．血浆等体祝混舍，混合后接100“I，／份分装，取一份混合样品采用 BI十Rad公司生产的血浆白蛋白和196去除试剂盒去除血浆中高丰度蛋白质．按说明书操作．得到去除高丰 度蛋白质的溶液。将冰丙酮(含【Jc)7“p硫摹E醇)加^处理好的溶液(耐c丙酮：去除高丰度蛋白质的洛液按 体积4：1配置)，震荡均匀t一20℃沉淀过夜．8∞0 r／…离心30…。将沉淀真空干燥，加入裂解液溶解 蛋白质。蛋白质含量测定采用Bradfo州法。 五、2DF和染色 第一相等电点聚焦基本上按照巧ellguⅢ等的方法进行．采用18 cm非线性pH3～10胶条。第二相在 B·”RadP州eln II电泳仪上进行sDs凝腔垂直板电泳，板间距为1呲分离胶浓度为1l5