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我国西洋参引种30年后遗传稳定性研究 　　[摘要]以人参及加拿大西洋参为对照，对我国14个产地的西洋参的遗传多样性进行分析，以了解我国西洋参引种30年后遗传稳定性是否发生了明显变异。应用了RAPD分子标记技术，POPGEN32数据分析，NTSYS2.10聚类图绘制。结果显示，各产地西洋参遗传多样性丰富，其中13条随机引物共扩增出多态性条带81条，多态性83.51%；有效等位基因数（Ne）1.456 7；Nei′s基因多样性指数（H）0.274 8；Shannon′s多样性信息指数（Ho）0.419 4。聚类分析可知，人参与西洋参分类明显，特别发现无人参生产的地区的西洋参与有人参生产的地区的西洋参可明显各聚一类，认为在遗传上未达到质的变异。因此提出吉林省西洋参要注意建立良种田，以保持种质纯净的建议。 　　[关键词]西洋参；随机扩增多态性DNA；遗传稳定性 　　西洋参Panax quinqufolium L.为五加科多年生草本植物，以根入药，是《中国药典》中的品种[1]。西洋参原产于美国、加拿大[2]。20世纪80年代后开始规模化在中国种植[3]。其中，东北栽培区是西洋参的主要栽培区，栽培面积占全国的50%以上[4]，尤以吉林省为主。由于吉林省也是我国人参P. ginseng C. A. Meyer的主要产区，二者在分类学上的亲缘关系极其相近，又都是常异花授粉植物[5]，因此我国引种30多年，西洋参的遗传稳定性是否会受到人参影响是值得关注的课题。 　　本试验采用RAPD分子标记技术以人参和加拿大产西洋参为对照，对我国不同产地的西洋参进行种质资源多样性研究，可说明我国西洋参种质是否存在变异现象，为西洋参建立良种田的必要性提供理论依据。 　　1 材料 　　供试材料为3个吉林省产地的人参、加拿大3个产地的西洋参及国内14个产地的西洋参，参龄4年，均通过吉林农业大学中药材学院田义新教授鉴定。样品来源、编号与代号情况见表1。 　　TC-XP型PCR扩增仪（杭州博日）；BIS910凝胶成像系统（北京东胜）；超微量紫外-可见分光光度计（北京百泰克）。2×Power Taq PCR MasterMix（北京百泰克）；100 bp DNA Maker（北京鼎国昌盛）；随机引物（北京六合华大基因科技）。 　　2 方法 　　2.1 基因组DNA提取 采用CTAB法[6-7]提取基因组DNA。 　　2.2 引物的筛选 用随机选取的25个引物进行扩增，筛选出13个多态性丰富，条带清晰且重复行良好的引物用于20个样品的DNA扩增。 　　2.3 RAPD-PCR扩增及电泳检测 扩增反应体系为20 μL：2×Power Taq PCR MasterMix 9 μL （2 mmol?L-1 Mg2+）；引物1.5 μL （10 mmol?L-1）；DNA模板1 μL （40 mg?L-1）；ddH2O补足20 μL。 　　PCR扩增程序：94 ℃ 3 min； 94 ℃ 1 min，38 ℃ 45 s，72 ℃ 1 min，40个循环；72 ℃ 7 min。4 ℃保存。 　　电泳检测：扩增后的产物使用含有0.5 g?L-1 EB的2%的琼脂糖凝胶电泳分离，电压100 V，电泳1 h，使用凝胶成像系统化照相，保存，见图1，2。 　　2.4 数据统计及分析 对分离后的电泳条带进行人工读带，其中每条条带视为一个分子标记[8]，以100 bp DNA Maker为标准，对重复性好的条带进行统计，有带的记为“1”，无则为“0”，形成0/1/矩阵。将数据输入数据矩阵，使用NTSYS-pc软件对20个样品之间的相似系数进行分析，构建遗传树状图，进行聚类分析。用软件POPGEN32对样品进行遗传参数分析。 　　3 结果 　　3.1 RAPD-PCR 13个引物对人参3个产地及西洋参17个产地的DNA样品进行PCR扩增，条带在3～11条不等，扩增的片段在100～2 000 bp。引物P3扩增的的条带最多，为11条；引物P1扩增的最少，为3条。13个引物共扩增出97条重复性高、清晰的条带。平均每个引物扩增出7条，其中多态性条带为81条，多态性为83.51%，见表2。 　　3.2 遗传多样性分析 由POPGEN32软件分析，20个样品间种间的遗传多样性非常丰富，平均每个位点的有效等位基因数（Ne）为1.456 7；H为0.274 8；Ho 为0.419 4，数据表明人参与西洋参中间的遗传多样性非常丰富。在种内水平上，Ne在1.014 6～1.072 9，平均为1.047 1；Nei′s基因多样性指数（H）反应了基因的多样性和基因的分化程度，在0.008 5～0.047 0，平均为0.030 8，表明种内遗传多样性偏低；Shannon′s多样性信息指数（