LAMP基因快速检测技术在微生物检测中应用.pdfVIP

微生物实用技术生态环境应用学术研讨会 LAM P基因快速检测技术在微生物检测中的应用 陈洵杜正平谭慧媚韩长磊常晓斌 曹以诚· 广州华峰生物科技有限公司¨ (广州经济技术开发区科学城揽月路80号广州科技创新基地C区401，邮编510663) 摘要：LAMP等温扩增技术是近年发展起来的核酸扩增基因检测技术，具有准确、灵敏、快速、经济 AMP 便于基层现场使用等显著优点。本文着重介绍了LAMP恒温扩增技术的原理，以及我公司开发L 基因快速检测试剂盒在微生物快速检测中的应用． 关键词：LAMP，等温扩增，基因快速检测 (一)食源性致病微生物和临床致病微生物检测行业的发展现状 随着生态环境的破坏、经济全球化的急剧发展等环境和社会因素变化，食品安全、环境保护和医疗 健康问题日益受到关注。病原微生物正在向人类发起挑战：新的致病微生物突变对人类社会构成严重威 胁；大规模突发性疾病是当前生物医学面临的重大挑战；一些重大传染病的死灰复燃，在·ti我国和世界 人口大多数的欠发达地区情况仍然严重。 致病微生物的检测技术急需向高通量、高精准度和快速现场应用多元方向发展。目前基层食品安全、 环境卫生和医学临床对致病微生物的检测诊断仍以微生物分离培养技术为主、分子或生化手段为辅，通 常．r序繁复、耗时K、费用高，并且灵敏度和特异性不强。国内外学者对致病微生物的检测方法进行了 人量研究，建：、上了从病原分离鉴定、特异蛋白的免疫学检测技术、形态学鉴定和自动生化鉴定，剑核酸 探针、PCR等分子生物学检测方法。在基因水平上的核酸检测，其灵敏度远高丁．病原分离鉴定，同时避 免了医学临床检验上的窗口期影响，赢得时间，对丁预防控制重人传染性疚病至关重要。近年来核酸检 测在快速性、安全性、准确性和灵敏性等方面都有很大的提高。这些新技术突破了传统的形态学、生化 反应等1只模式，不需要对微生物进行分离提纯，而直接用样品或样品的增菌液进行快速检测，并且与分 子生物学技术及生物信息学设计相结合，向准确、快速、灵敏和自动化的方向发展。 目前流行的以PCR为代表的核酸检测技术在实际应用中也存在一些问题，如PCR技术需要专门的 PCR仪，且存在易交叉污染和操作过程烦琐的缺点。而荧光实时定量PCR虽然较好地解决了交义污染， 并简化了操作过程，但却需要定量PCR仪，因此不适用于现场快速检测。且实时定量PCR技术中荧光 探针的成本较高，加人了推广的难度。目前国内外的致病微生物的检测产品市场中，缺少快速、准确、 简便的分子检测试剂盒，不能满足用户的检测要求，加上现有产品的假阴性和假刚性问题比较严重，导 致用户使用的信心不足。所以，及时运用生物技术发展的最新成果对满足病原微生物检测的要求具有重 要意义。 食品安全检测，医学病原微生物诊断，农备牧致病微生物检测，水体微生物等等领域，都1卜常需要 快速、准确、简便、设备投入少的核酸检测技术。我公司构建的LAMP技术开发平台和系列产晶正适应 ·通讯作者，华南理T大学生物科学bT程学防广州。#峰生物科技钉限公司．Emaihyccao@scut．edu．cn ¨http：／／www．hfl)iotech．C01ffl 243 锚生物实用技术生毒环境庸用}术W☆ 这发展趋势和市场需求。 (二)LAMP技术背景及原理 等温扩增核酸快速检谢技术是病原核酸检测技术方面的长足进步，现已建立起来环介导的等温扩增 isoth—al 技术(LAMP，Ioop-medlaled 即可完成核酸扩增反应，快造、特异地发现靶基因。 LAMP技术利用BstDNA聚合酶和根据不同靶序列设计的两对内，外引物，特异性识别靶序列上 的^个独立区域，窟动链置换反应。LAMP反应的中、内引物与目标DNA相应区域匹配，启动互补链 台成，形成哑铃状DNA链。这种结构再蚍自身为模板．合成延伸形成茎-环DNA结构，这个莩一环结构 DNA作为LAMp循环的起始结构．由于内引物与茎．环的环区域匹配．；『