宫颈疾病诊断中HPV检测应用的进展.pdfVIP

宫颈疾病诊断中HP7检测应用的进展 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒相关肿瘤室刘宏图 病毒相关肿瘤室宫颈癌是全球女性第二大常见癌症。在发达国家，由于以宫颈组织 筛查为手段的预防控制措施的普及，近年来，宫颈癌已呈下降的趋势。然而在发展中国 家，宫颈癌仍是女性高发且致死比率居于上位的癌症。在我国，每年约lO万女性死于富 颈癌。自1970年代末至1980年代初，人乳头瘤病毒(human 与富颈癌发生的紧密关联的假说逐渐被建立起来。 一、HPv与宫颈癌的病原学关系 HPV属乳头瘤病毒科，已经超过115种HPV被鉴定出来，其中40种与生殖道传染病 有关，99．7％的宫颈癌病人样品中发现了HPV的存在，其中以HPV-16等高危亚型分布最 多，此外，还有其他14个HPV型别与宫颈癌密切相关(表1)。 近年来，在WHO等国际组织的支持下，进行了全世界范围的有关HPV分子流行病调 查研究，其结果：HPV的感染率为5-15％，感染率的高低与所在地区的公共卫生状况有关。 1980年代开始，我国便开始了有关HPV的临床对照研究，特别是2006年，乔友林研究组 发表了深圳和山西省的ItPV分子流行病调查结果。根据尚未完全的数据表明：我国HPV 感染率与国外基本一致。值得一提的是，欧美等发达国家较为常见的HPVl8型别在我国 属比较罕见的型别，另一方面，国外较不常见的HPV52和58两型别在我国较为常见，两 型别在ILPV阳性人群中合计约占20一30％。 表1与宫颈癌和宫颈炎症相关的主要HPV型别 危险程度 HPV型别 高危型 16， 18， 3l， 33， 35， 39， 45， 5l， 52， 56， 58，59， 68， 73， 82 疑似高危型 26， 53， 66 低危型 89 二、HPv的检测方法 1．HPV的免疫学检测方法 HPV在人体细胞及组织中的免疫检测在实际应用上一直面临着非常大的困难。其主要 原因在于病毒的晚期衣壳蛋白仅在生殖道感染部位表达，此外，感染组织中只有非常少 量早期蛋白的表达，最重要的还是在于缺乏兼具良好的灵敏性和特异性表达蛋白的抗体。 因为BPV(Bovine 蛋白进行交叉反应，该抗体曾被使用。然而，该抗体仅具有很低的灵敏性，同时，又无 法甄别感染的HPV的型别，该方法已经被放弃。 由于}IPV感染不能引发病毒血症，因此，几乎无法检测出血相中HPv的存在。更重 要地，由于HPV的Ll以及E6、E7等基因的产物型别间的变异率比较大，某一型别HPV 的抗原或抗体几乎不能与其他型别相应的检测对象具有交叉反应。无论是灵敏性和特异 性上看，以抗原一抗体反应为基础的检测都远远不如后述的HPV的核酸检测。最近， alkaline Pastrana等开发的SEAP(secretedphosphatase，分泌型碱性磷酸酶)法检测 IIPV假病毒的方案，获得了较高的特异性，适于高通量的HPV检测。由于价格昂贵，依然 不适于～般的诊断与检测。 2．HPv的核酸检测／诊断方法 正是由于长期以来高质量的HPV抗原和抗体的缺乏，HPV的核酸检测一直倍受专 注。乳头瘤病毒科中，在核酸一级结构上，不仅种间存在很大的同源性，种内型别间也 存在比较大同源率，最高为90％，某一型别内的变异体之间存在90-98％的同源率。这一 特性决定了以直接杂交法需要选择变异较高的区域作为探针区。早期的HPV分型实验中， situ 有人曾经尝试过用DNA印记杂交法(SouthernBlots)或原位杂交法(in II方法使用HPVDNA-RNA探针杂交的方式， 近年来，除了Digene公司的HybridCapture 其他的检测方案均采用了PCR扩增的方法。在HPV的检测包括DNA和RNA的检测两类， 在这里我们主要针对DNA检测方法进行介绍。 表2主要HPV检测／诊断系统的检测能力 检测／诊断系统 出品公司 可以检测的HPV型别 HC2