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抗生素对他克莫司产生菌的影响 郑军荣卓锦明郑卫程元荣 (福建省微生物研究所福州550007) 摘要：他克莫司产生菌弗氏链霉菌FCZ0311经自然分离得到三种主要类型的菌落：浅红、 桃红和灰白型。研究了抗生素对三种不同类型菌株的生长、菌落形态、培养特征和他克莫司合成 0311原菌株高30％的3株突变菌株。 关键词：他克莫司 弗氏链霉菌FCZ0311抗生素敏感性菌种选育 制剂(图1)【1l，临床上用作器官移植的抗排斥和治疗自身免疫性疾病药物。他克莫司产生菌除了 产生他克莫司外，还产生一些副产物。 o ／=C№ 图1．Tacrolimus的化学结构 本研究不采用通常人们应用的UV、NTG等许多物理和化学诱变因子进行菌种选育，获撂高 产菌株n-61。我们通过观察某些抗生素对他克莫司产生菌弗氏链霉菌FCZ0311的影响，试图寻找 对该菌株有一定作用的某些抗生素，从中进行优良菌株的选育。 l材料与方法 1．1实验菌 FCZ 0311)，由福建省微生 他克奠司产生菌——弗氏链霉菌FCZ031I(Streptomycesfradiae 物所提供。 1．2抗生素 氨糖类抗生素：庆大霉素和乍那霉素。 四环类抗生素：四环素。 大环内酯类抗生索：红霉素。 含氮大环内酯类抗生素：雷帕霉素(含量99％)和他克莫司(含量98％)，由福建省微生物 研究所提供。 116 安莎类抗生素：利福平(含量94％)。 杂环娄抗生素：丝裂霉素C。 CZ2407。 抗生素：Antibiotic lj培彝基 0％，琼脂l5％， 斜面和分离琼脂培养基：麦芽浸出汁20％，酵母漫出汁05％，葡萄糖1 7．2-74。 pH 5％，酵母糟05％，玉米浆0 种子培养基：甘油12％，可溶性淀粉11％，葡萄糖0 5％，CaC03 6．5 0I％，pH 0 发酵培养基：玉米淀粉5O％，干酵母粉10％，玉米浆10％，KmP043H202％，CaC03 005％，pH6．8。 1．4自然分膏 弗氏链霉菌FCZ0311琼脂斜面孢子用少量15％的灭菌甘油水刮洗，玻珠打碎，经连续稀释， 取适量涂布于分离培养琼脂平板，28C培养lo天左右，观察茵落类型和生长情况。 1j他克莫司产生曹对抗生囊t喀性 u 抗生素用适当的溶剂配成1000 g／mi母液，4--倍稀释法进行稀释，加^熔化并冷却至50 ℃左有的分离培养基中，充分混匀．制成琼脂平板。选取单苗落数在30．50个的培养皿，影印到 含有不同浓度抗生素的分离培养基上，28C培养7。10天，观察不同平板上菌落生长情况，记录 最低抑菌浓度。 1．6发酵 酵培养基(500ml三角瓶)，28C、220rpm振荡培养5天。 1．7他克羹司青量曲测定(HPLC法) 振荡提取30nfin，离心收集上清液。苗丝沉渣重复r述提取步骤．合并一次￡清液，进彳_样品测定。 HPLC分析条件：Lc 6×250咖n，5u)；流 10ATvp型高效液相色谱仪(岛津)，C18柱(4 动相乙腈：水：磷酸(600：400：1