泛素样蛋白SUMO-1对羊种布鲁氏菌16M在小鼠RAW2.7细胞内生存影响的初步研究.pdfVIP

第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集  记可以快速、便捷地构建布鲁氏菌基因缺失株。然而 Sac B 基因作为负筛选标记时并不是蔗糖浓度越 高越好，而最佳筛选的蔗糖浓度最好控制在 5-8% 。 （2 ）本研究中体液免疫的检测结果显示，缺失株 Δpmm 与疫苗株 S19 的抗体增长趋势是一致的， 随着时间的延长血清中的抗体水平呈现上升趋势，这也表明缺失株与疫苗株 S19 诱导小鼠产生体液免 疫的水平是一致的。但 Δpmm 缺失株的抗体水平略微低于 S19，可能是因为缺失了pmm 后影响了布 鲁氏菌 LPS 的合成从而使得LPS 不完整，然而 LPS 又是布鲁氏菌的一个重要抗原，这可能就是造成 Δpmm 缺失株的抗体水平略低于疫苗株 S19 的原因。 （3 ）布鲁氏菌是一种典型的胞内寄生菌，该菌感染宿主后主要定居于宿主的免疫器官和组织， 布鲁氏菌进入机体后主要寄生在吞噬细胞内，引起机体的细胞免疫。IFN-γ 主要由机体的 T 淋巴细胞 产生，主要功能是参与巨噬细胞的活化。因为只有活化的巨噬细胞才具有杀伤胞内的微生物、杀伤肿 瘤细胞的功能。INF-γ 对于杀死细胞内的布鲁氏菌发挥了非常重要的作用[6] 。已知 IFN-γ 有抗菌的作 用，所以本实验通过检测机体分泌的 IFN-γ 的含量来反映机体的抗菌能力和细胞免疫水平。IFN-γ 检 测结果表明缺失株 Δpmm 诱导机体产生的 IFN-γ 的水平低于疫苗株 S19，结合毒力试验结果，缺失株 ΔwbkA 和 Δpmm 较亲本株毒力下降所以侵染细胞的能力也会下降从而导致细胞免疫水平降低，细胞 因子IFN-γ 的检测结果与之一致。 参考文献（略） 泛素样蛋白 SUMO-1 对羊种布鲁氏菌 16M 在小鼠 RAW264.7 细胞 内生存影响的初步研究 监通，张俊波，乔军，陈创夫* （石河子大学动物科技学院，新疆石河子，832000） 摘 要 SUMO （small ubiquitin-related modifier）是泛素（ubiquitin ）类蛋白质家族的重要成员之一，类泛素化修饰主 要是参与细胞周期调控、信号传导、转录调控、细胞凋亡、细胞增殖与分化、蛋白转运、DNA 修复以及应激反应等多 种细胞功能调控，SUMO 在一些细菌感染宿主过程发挥重要的调控作用。因此，研究布鲁氏菌介导对细胞内类泛素的 表达影响与SUMO1 在布鲁氏菌引起的凋亡中的影响具有重要意义。我们构建pcDNA-SUMO1 真核表达载体；通过荧 光实时定量方法检测pcDNA-SUMO1 质粒最佳转染条件，然后通过瞬时转染重组质粒pcDNA-SUMO1 使 SUMO1 在 细胞中过量表达；用布鲁氏菌16M 菌株侵染巨噬细胞后，通过涂板对布鲁氏菌进行菌落计数，检测SUMO1 对布鲁氏 菌胞内存活的影响，同时用流式细胞仪检测 SUMO1 过表达对布鲁氏菌引起细胞凋亡的影响。研究表明，SUMO1 在 巨噬细胞中的过量表达可抑制布鲁氏菌在胞内菌的生存，并且促进布鲁氏菌16M 介导巨噬细胞的早期凋亡。 关键词 羊种布鲁氏菌16M；泛素样蛋白SUMO-1 ；过量表达；胞内生存；细胞凋亡 布鲁氏菌病（brucellasis ）（简称“布病”）是由布鲁氏菌（Brucella.spp ，简称“布菌”）引起的，最常 见的全球性细菌性的人畜共患传染病，被《中华人民共和国传染病防治法》列为乙类传染病[1-2] 。自 1 887 年 Bruce 首次从死亡士兵的脾脏中分离到布菌迄今已百余年，目前该病疫情仍广泛存在并有回升 势态，在全世界有 170 多个国家和地区有布病的存在和流行，所造成的经济损失每年高达 30 亿美元。 目前，主要是利用弱毒疫苗来防控该病，但仍未得到有效地控制，主要是由于疫苗安全性差、稳定性 差，免疫原性差，常出现返祖现象等原因。而且，对于布鲁氏菌的感染致病机制和感染后对宿主免疫 系统的机制也不清楚，从而无法从根本上解决布鲁氏菌病的传播问题。 类泛素化修饰是一种蛋白翻译后修饰的过程，在活细胞生物进程中有很大的影响[3] 。类泛素蛋白 在不同的物种中是高度保守的，而且已经被证明，在真核生物细胞生物进程中类泛素化修饰扮演着非 常重要的角色[4] 。类泛素化修饰主要是参与细胞周期调控、信号传导、转录调控、细胞凋亡、细胞增 殖与分化、蛋白转运、DNA 修复以及应激反应等多种