肿瘤消诱导肿瘤细胞凋亡的作用研究.pdfVIP

动物医学进展 ，2014，35(12)：84—88 ProgressinVeterinaryMedicine “肿瘤消’’诱导肿瘤细胞凋亡的作用研究 江跃德 ，曹晓蕾 ，刘建军 ，王晶钰 ，康永祥。 (1．西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100；2．西北农林科技大学林学院，陕西杨凌 712100) 摘 要 ：研 究 “肿瘤消”的抗肿瘤活性和作 用 ，为临床 用药提供依据 。通过 MTT法检测 “肿瘤消”对 多种 肿瘤细胞株和正常细胞存活率的影响；采用 Hoechst染色法和 DNA 片段化分析对 “肿瘤消”诱导MDCC— MSBl细胞凋亡的作用进行检测 ；Westernblot检 测 “肿瘤消”诱导 MDCC—MSB1细胞 凋亡相 关蛋 白因子表 达情况。MTT法检测结果显示 ，“肿瘤消”对 MDCC—MSBl、C6、SP2／0和 A549细胞的增殖具有明显抑制作 用，对 293A细胞增殖无显著影响；Hoechst染色和 DNA 片段化分析均证 实 “肿瘤消”能诱导 MDCC—MSBl 细胞凋亡 ；Westernblot检测发现 “肿瘤消”诱导 MDCC—MSB1细胞凋亡与凋亡 因子 caspase3、caspase8和 caspase9的活化有关。证实 “肿瘤消”具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。 关键词 ：“肿瘤消”；肿瘤细胞 ；MTT法；细胞凋亡 中图分类号 ：$852．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2014)12—0084—05 癌症 (Cancer)已成为 当前人类健康的一大杀 为临床用药提供指导，对于科学、合理地开发太 白山 手。根据世界卫生组织 国际癌症研究机构 (Interna— 中草药资源具有重要意义。 tinalagencyofresearchoncancer)报告 ，2012年全 1 材料与方法 球新增癌症病例 1400万，死亡人数达 820万口]，动 1．1 材料 物肿瘤病 的发病率和病死率也呈上升趋势 。马立克 1．1．1 细胞株与试剂 马立克淋巴瘤 MDCC—MS— 病 (MarekSdisease，MD)和禽 白血病 (Avianleu— B1细胞株 、大 鼠胶质瘤C6细胞株 、小鼠骨髓瘤SP2／ kosisvirus，ALV)等疾病是禽类常见的肿瘤病 ，具 0细胞、人肺腺癌 A549细胞株和人胚 肾 293A 细胞 有高致病性和传染性 ，给我 国养殖业造成了严重损 株均为实验室保存 ；RPMI-1640培养基购 自Hy— 失_2]。细胞凋亡 (apoptosis)是 由基因控制的细胞 自 clone公司；胎牛血清购 gtGIBCO公司；MTT购 自 我消亡过程 ，诱导肿瘤细胞凋亡 已成为 当前 国际肿 Sigma公司；caspase9、pro—caspase8、pro—caspase3 瘤治疗研究的热点。近年来的研究表 明，许多 中草 蛋 白质单克隆购于 SantaCruzBiotechnology公司； 药的有效成分和提取液具有诱导肿瘤细胞凋亡的作 Cy3标记的B—Actin抗体购 自北京博奥森生物技术 用Ⅲ 。 有 限公司 ；HRP标记的IgG二抗购 自AbcamInc公 秦岭主峰太 白山为我 国三大药山之一，中草药 司；RIPA裂解液 、BCA蛋 白浓度测定试剂盒和 Ho— 资源丰富，其 中有 149种以 “七”字命名 的药用植物， echst33258染色试剂盒购 自碧云天生物技术研 究 即太 白 “七药-[43。早在 1946年 ，KingL等 就从 所 。 桃儿七中提纯出鬼臼毒素并用于抗癌 。太 白人民利 1．1．2 中草药制剂 “肿瘤消”主要 由以下药物组 用 “七药”治疗肿瘤的历史悠久 、经验丰富，其 中不乏 成 ：芋儿七 (Trillium tschonoskiiMaxim)、金牛七 特效药方。我们对这些抗肿瘤方剂做了大量的筛选 (Aconitumtaipeicum Hand．Mzt)、铁牛七 (Acon