铜绿丽金龟雌虫触角全长cDNA文库的构建及质量分析.pdfVIP

艋 物保 2015。41(1)：108—115 PlantProtection 铜绿丽金龟雌 虫触角全长 cDNA文库 的 构建及质量分析 赵 莹L， 尹 姣 ， 李克斌 ， 曹雅忠 ， 仵均祥 (1．农业部西北黄土高原作物有害生物综合治理重点实验室，西北农林科技大学植物保护学院，杨凌 712100； 2．中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室 ，北京 100193) 摘要 为了研究铜绿丽金龟(AnomalacorpulentaMotschulsky)成虫嗅觉相关蛋 白的功能，本文以铜绿丽金龟雌成 虫触角为原始材料提取总RNA，利用 SMART技术构建了铜绿丽金龟雌虫触角全长 cDNA 文库。经测定，原始文 库滴度为6．74×10pfu／mL，扩增后的文库滴度为 1．O8×10 pfu／mL，文库重组率为98．98 。随机挑取 24个单 克隆，通过茵液PCR检测得知文库插入片段的大小在0．5～2．0kb之间，片段平均长度为 1．0kb左右。经过茵液 PCR并测序筛选 cDNA文库，本试验获得 了两条编码气味结合蛋白的全长基因序列AcorOBP1和AcorOBP2。以 上数据表明，已获得高质量的铜绿丽金龟触角全长 cDNA文库，并筛选、克隆获得了气味结合蛋白基 因序列。这为 进一步研究触角内气味结合蛋白的功能奠定了基础。 关键词 铜绿丽金龟； 触角； 全长 cDNA文库 中图分类号 ： Q78．5 文献标识码：A DOI： 10．3969／j．issn．0529—1542．2015．01．021 Constructionandqualityanalysisofafull-lengthcDNA library from antennaeofAnomalacorpulentaMotschulsky ZhaoYing ，YinJiao ，LiKebin ，CaoYazhong ，W uJunxiang (1．KeyLaboratoryofIntegratedPestManagementOnCropsinNorthwestLoessPlateau，Ministryof Agriculture，CollegeofPlantProtection，NorthwestAFUniversity，Yangling712100，China； 2．StateKeyLaboratoryfo，BiologyofPlantDiseaseandInsectPests，InstituteofPlant Protection，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Bering100193，China) Abstract InordertostudythefunctionoftheolfactoryassociatedproteinsinAnomalacorpulentaM otschulsky，a full-lengthcDNA librarywasconstructedbasedonSMART technique．TotalRNA wasextractde from thefemaleall- tennaeofA．corpulenta．ThetiterofprimarylibraryWas6．74X10pfu／mL。andtherecombinantrateWas98．98％．The amplifide librrayshowedatiterof1．08×10 pfu／mL．Twenty-fourmonoclonalcolonieshadbeenpickedrandomly anddetectedbyPCR ．Theresultsshowedthatthesizesofamplifiedfragmentswere0．5-- 2．0kb，withanaverage of1．0kb．ByPCR andsequencing，thisstudyobtainedtw