鱿鱼鱼精蛋白的提取、纯化及其生化特性.pdfVIP

鱿鱼鱼精蛋白的提取、纯化及其生化特性、 钟立人张合文 杭州商学院 点，鱼精蛋白不仅具有促使细胞发育殖的作用，而且一旦将其分离出来．能有效抑制多种食品腐败菌的生长和 1942]。同时，这种针精蛋白还有降血压、助呼吸、促销化、抗菌消毒、抑制肿瘤的生长等多种作用 繁殖[Miller [Sharifa等1993】。 目前，已有从鲑、乌鱼、鲤等鱼种中分离到鱼精蛋白的报导[Uyttendaele和Debevere1994，张文重1992。高 桂窿1995]，其中蛙鱼鱼精蛋白在日本等国已成功用于食品贮藏保衅[Nakamura和Kato 1994，／a}ima等 1996]。鉴于我国沿海水产资源的特点．本研究以鱿鱼(Squid)作为提取原料。筑鱼，学名枪乌贼．属头足纲，枪 乌贼科，我国南北沿海均有分布，且产量相当丰富，但目前国内外尚未见到有关靛鱼鱼精置白的研究报导。采 用已报导的佳、乌鱼、鲤等苴精蛋白提取方法对提取筑鱼鱼精蛋白经实验证实并不适用。经反复试验。找到了 一种提取抗鱼鱼糟置自的较好方法。该方法的特点是：手续较简便，提取得事较高。用经过纯化的样品进行了 等电点和相对分子质量的嗣定等啦鱼鱼精蛋白的研究，以期为航鱼精巢组织的综合利用。开拓一条新途径。 l材料和方法 1．1实验材料和主翼仪■ 筑鱼糟巢组织(中外合资舟山兴业有限公司坑鱼加工厂提供)；鱿鱼鱼精蛋白硫酸盐(Sigma试剂)；组织捣 化学试齐公司)。 1．2实t和方法 1．2．1 It鱼盘精蛋白提取方法 成熟靛鱼精巢组织生二量长黯炉均浆液L型曷胪虹噬业坚卫蚰n叫勤翻盥蓝上清液 堑墅睦翻￡』‘9瞳盘上清液39=二5螳盟＆而面罄璺§篝丽鱼精蛋白沉淀。 1．2．2筑鱼鱼精蛋白的纯化在鱼精蛋白的提取过程中。可能会混入杂蛋白，核酸等其它物质。因此必须对提 取物进一步纯化。本试验采用葡聚凝胶柱层析法分离纯化蛋白质[张龙翔1997]。 6．7，0．1MKCI液．洗脱速度：40mL／h。检测波长：280hm。 1．2．3筑鱼鱼精蛋白纯度鉴定经柱层析化后的样品。采用聚丙烯酰胺等电聚焦电泳法对其进行纯度鉴定。 取的鱿鱼精蛋白(2．5mg／mL)。 粗品经柱层纯化后的第二峰(2．5mg／mL)。 上样量：均为10uk 1．2，4SDS一囊丙烯酰胺凝胶电泳测定相对分子质量电泳条件：凝胺浓度10％，采用垂直平板电泳槽。 低分子量标准蛋白样品：碡酸化酶B(94000)，牛血清白蛋(67ooo)，肌动蛋白(43000)，碳酸酐曹(30 000)，烟草花叶病毒(17500)，(上海生物化学试剂公司)。 鲑鱼鱼精蛋白(s嘧na试剂)20uL。 ·406· 纯化的鱿鱼鱼精蛋白20uL。 电泳方法：样品上样进行电泳。结束后，测定染料迁移距离及各样品迁移距离。由公式相对迁移率=样品 迁移距离染料迁移／距离，求得各相对迁移率，并翻得标准曲线。然后依据标准曲线求得筑鱼鱼精蛋白的相对分 子质量，标准曲线见图3。 2结果与分析 2．1柱曩折结果 葡橐糖凝胺G一25柱层析对鱼精蛋白的纯化结果见图1。 嚣 l¨0．6 02 20 40 60∞ioo 20 40 60¨100 洗曩体辊mL 镜l悻曩／I山 -．健鱼盘糟蛋白(sip-)b．Sti鱼精蛋白 圈l蕾聚■麓胺G一25柱晨折对■精誓白的埔化搪果 2．2量糟叠白纯度鉴定 在鱿鱼鱼精蛋白制取过程中，沉淀鱼精蛋白时，采用先冷乙醇，后三氯乙酸的分级沉淀。若氯化钠抽提后， 直接采用三氯乙酸沉淀，则会同时沉淀大批杂蛋白，如图2a。先用冷乙醇沉淀，则可使大批杂蛋白沉淀，同时鱼 精蛋白几乎不沉淀，再用三氯乙酸处理。则可得较纯净的鱼精蛋白样品，如图2b。 在图1b中，收集Ⅱ号尖峰部分，其与标准鲑鱼鱼精蛋白出峰体各接近，对其进行电泳。如图2c中其等电点 靠近碱性螬，且条带单一，纯化效果较好．与