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重金属快速检测技术研究进展 王宏 向军俭 唐勇 邓宁 暨南大学分子免疫学与抗体工程研究中心，广州，510632 摘要 重金属超标会造成环境污染，不但会严重影响农畜产品的产量与品质，更重要的是它能通过食物链进入人体， 威胁人体健康。因此，快速而又准确地检测样品中的重金属离子至关重要。该文总结了国内外有关利用生物传感器、 免疫学检测方法等快速检测环境及农畜产品中重金属残留的研究进展，以期为建立灵敏度更高、更准确、更快速的 检测方法提供参考。 关键词 重金属；快速检测 研究者通过使用氨基酸或肽生物模拟配体作为识别元件来减轻这种缺陷，实现某些金属离子检测限低于皮摩尔 水平并且具有良好的选择性[1]。通过促进酶活检测金属比抑酶检测方法更具有选择性，因只有极少数金属离子能活 化同一种特殊的酶。例如，Zn2+是活化碱性磷酸酶的特殊金属离子辅因子，利用这一特点实现检测Zn2+，检测限达 酶活检测方法检测背景值较高。 1．2DNA生物传感器 具有催化活性的DNA发明之后，近来一些研究者将其应用于检测金属离子的传感器研究。对一些金属离子具有 DNA酶与高度敏感的荧光检测组合检测铅。另外，DNA酶标记纳米金颗粒已用于检测涂料中的铅[3]。这种传感器 由5端巯基化的12bpDNA标记的、直径13nm的纳米金颗粒、DNA酶及其底物组成。设计的底物序列能与标记于 纳米金颗粒上的巯基化DNA末端特异性杂交，同时维持DNA酶的识别区。杂交引起纳米金颗粒聚集，从而显现蓝 色。当Pb2+存在时，DNA酶催化水解底物，防止纳米金颗粒聚集，显现红色。 1．3细胞生物传感器 已有大量文献报导通过构建不同的特异性微生物细胞传感器报告菌株检测各种重金属，特别是对污染环境中重 金属生物有效性的评价。将来源于重金属敏感的细菌启动子分别与各种报告基因融合，如表达细菌荧光素酶、萤火 z基因，构建高敏感和高选择性的细菌性细胞生物传感 虫荧光素酶、绿色荧光蛋白和IB-gal的1llx、1uc、g昂和lac 器。金属离子的存在引起报告基因表达，从而产生信号[4]。己研发出检测汞、铜、铅、亚砷酸盐、钴、镍、和镉等 的细菌性细胞生物传感器，检测限达纳摩尔、甚至飞摩尔水平，达到或低于GF．AAS，ICP．MS和阳极溶出伏安法。 与酶生物传感器相比，细胞生物传感器要求的检测条件更宽松；并且它们是自身复制，大部分只需要被检物诱发反 应。它的局限性是需要营养、氧气等维持检测环境，响应时间长，批间稳定性、一致性不好。 2免疫学检测方法 免疫学检测是以抗原抗体的特异性、可逆性结合反应为基础的分析技术。理论上能应用于可产生合适抗体的任 何污染物质。免疫学检测技术的开发主要有以下三个技术环节：人工抗原的合成、抗体的获得和免疫检测方法的建 立。1985年Reardan等人首次通过金属．螯合剂抗原产生并制备出其单克隆抗体，这为重金属检测提供了一种新的策 略——重金属免疫学检测方法。重金属免疫学检测方法具有检测速度较快、费用低廉、简单易携、高灵敏度和选择 性的特点。 2．1荧光偏振免疫检测 荧光偏振重金属免疫检测法(FPIA)是荧光偏振法与免疫竞争法的结合，其原理是样品中的金属离子与过量螯合剂 形成金属一螯合剂复合物后，与固定浓度的金属．螯合剂．荧光复合物竞争结合金属一螯合剂复合物抗体，然后 进入荧光偏振分析仪进行分析，通过与标准曲线对照得出金属离子的浓度。利用此方法建立的检测Pb2+、Cd2+的检 为O．37％[5]。 2．2一步竞争性(直接竞争)免疫检测 此法的基本原理是先将重金属抗体与固相载体结合，然后把作为检测的重金属抗原和已知浓度的酶标重金属抗 IA等建立的 原混合，二者在包被于酶标板孔中的抗体竞争结合，根据显色程度确定样品中重金属的含量。Darwish 一步竞争性免疫检测法检测人血清和环境水样品中Cd2+，检测限分别达0．2ppb和0．3ppb，并且样品中高浓度的其他 2．3间接竞争ELISA检测 本法的基本原理是样品中的重金属离子与过量螯合剂形成可溶性的重金属．螯合剂复合物，将其与已经包被在 酶标板上的重金属．螯合剂．蛋白质复合物竞争结合重金属．螯合剂的单克隆抗体，添加酶标二抗和底物显色， 与标准曲线对照，即可得出样