黑曲霉有机磷农药降解酶的纯化及其性质.pdfVIP

江苏农业学报(Jiaagsu ofAgr．Sci．)，2012，28(3)：549～554 王继雯 ，甄 静 ，谢宝恩，等．黑曲霉有机磷农药降解酶的纯化及其性质[J]．江苏农业学报 ，2012，28(3)：549-554 黑 曲霉有机磷农药降解酶的纯化及其性质 王继雯 ， 甄 静 ，谢宝恩 ， 刘莹莹 ， 李冠杰 ， 周伏忠 ， 陈国参 (1．河南省微生物工程重点实验室，河南 郑州 450008；2．河南省科学院生物研究所有限责任公司，河南 郑州 450008) 摘要： 采用细胞破碎 、硫酸铵分级沉淀和SephadexG-75凝胶过滤的方法，对黑曲霉 (Aspergillusniger)J6产生 的有机磷农药降解酶进行分离和纯化，并对其酶学性质进行研究。结果显示 ：黑曲霉J6有机磷农药降解酶定位在 细胞膜上，其分子量为66000。该降解酶最适 pH值为7．0，最适反应温度为70℃，Fe“、cu 、Li、Zn 、Mg“、 NaN 、EDTA、SDS、PSMF对该降解酶有不同程度的激活作用 ，而 Mn 对其有轻微的抑制作用，ca和Triton对其有 强烈的抑制作用。 关键词：黑曲霉 ；有机磷农药降解酶；酶学性质 中图分类号： Q939．9 文献标识码 ：A 文章编号 ： 1000-4440(2012)03-0549-06 Purification 0fa 0rgan0ph0sph0ruspesticide-degrading enzymefrom As一 … ● 一 1 ‘ - ‘ pergiUusrogerJ6anditsproperties WANGJi．wen ’， ZHENJing ’， XIEBao．ell， LIUYing—ying。， LIGuan-jie ，。， ZHOUFu．zhong， CHEN Guo．can (1．KeyLaboratoryofMicrobialEngineeringofHenanProvince，Zhengzhou450008，China；2．BiologicalResearchInstituteCo．Ltd．，HenanAcademyof Sciences，Zhengzhou450008，China) Abstract： Aorganophosphorushydrolasefrom strainAspergillusnigerJ6wasisolatedandpurifiedbymeansofcell disruption，ammonium sulfateprecipitationandSephadexG-75chromatography，anditsenzymaticpropertieswerestudied． Theresultsshowedthatthedegradationenzymewaslocatedonthecellmembrane，withitsmolecularweightbeing66000 bySDS—PAGE．TheoptimalreactivetemperatureandpH ofthedegradationenzymewere70oC andpH7．0．Somemetali· ons(Fe ，Cu ，Li，Zn ，Mg )andchemicalreagents(NaN3，EDTA，SDSandPSMF)showedactivationonthedeg． radafionenzyme，whileMn displayedslightinhibition，andCa ，Tritonhadstronginhibition． Keywords： Aspergillusniger；orgnaophosphoruspesticide—dergadingenzyme；enzymaticproperty 有机磷农药由于具有高效和使用成本低等特 农药在土壤中的结合残留量一般 占施药量的2O％一 点，在世界农业生产中起着极其重要的作用。目前 70％，如对硫磷为45％，伏杀硫磷为80％ _2J。土壤 中国每年农药施用总量达 5X10。kg，杀虫剂 占 中的结合残留农药释放出来将产生诸多有害效 70％，杀虫剂中有机磷类品种 占70％；有机磷