大白菜汁抑制血小板聚集功能及其机制探讨.pdfVIP

第二十三届航天医学年会暨第六届航天护理年会论文汇编 ·医学技术· 1材料与方法 1．1主要试剂与仪器 PE： 藻红蛋白标记的抗P．选择素的McAb：CD61PerCP：是多甲藻素．叶绿素蛋白标记的抗血小板糖蛋白的GPIIIa的 YlPE为 (chrono-log公司)：肾上腺素(天津金耀氨基酸有限公司)。 1．1．2仪器FACSort流式细胞仪(美国BD公司)；全血血小板聚集仪(美国chrono-log公司)。 1．2研究对象与材料 1．2．1研究对象 1．2．1．1 16名健康志愿者，男8例，女8例，年龄27—65岁，平均年龄52岁，清晨、空腹、静息状态下采血， 排除标准：无血管、血液或呼吸系统疾病、高血压、感染及服用各种抗血小板功能的药物。 1．2．1．2健康普通大耳白兔10只，由北京科宇动物养殖中心提供，体重2．0-3．5kg，随机分为2组，每组5只， 即生理盐水组、大白菜汁组，实验前禁食12小时。 1．2．2研究材料无农药污染的大白菜。 1．3方法与步骤 1．3．1大白菜汁的制备清洗大白菜，放于榨汁机中，将大白菜榨成液状，放入无菌纱布中进行过滤，3000Xg 离心lO分钟，收集上清液，用NaOH调pH值为7．4，分装，储存于．20C冰箱内，实验前取出，融化备用。 1．3．2血小板聚集试验 1．3．2．1 富血小板血浆的制备采用19号针抽取健康志愿者静脉血，弃去针管前部约lml全血，注入装有0．3ml 小板计数为200x109／L，标本采集后两小时内完成测定。 度10 lamol／L)、胶原(终浓度2 r／min搅拌，反应时间为6分钟，记录血小板的最大聚集率，并计算血小板最大聚集的抑制率，血小板最大聚集 的抑制率=【血小板最大聚集率(对照管)．血小板最大聚集率(实验管)】，血小板最大聚集率(对照管)×100％。 1．3．2．3不同浓度的大白菜汁对血小板聚集率的抑制作用取正常人全血，分离PRP并调好PRP约200X109／L (方法如前)，用生理盐水将大白菜原汁调成以下六种浓度，分别为0、12．5％、25％、50％、75％、100％，分别 内，加入ADP、胶原及肾上腺素后，观察血小板最大聚集率(方法如前)，并绘制不同浓度大白菜汁对应的血小 板最大聚集率曲线。 1．4血小板Hb-R和CD62P的表达 1．4．1标本处理取正常人全血(抽血方法同前)，测定组分别取450．1全血与pH7．4的大白菜汁50m相混合； 浓度10pmol／L)、胶原(终浓度2 对照管加入PAC-1 FITC、 FITC、RGDS、pl删e叶1PE、CD61Pc,t--P各10山，处理后的血标本5Ⅲ：测定管加入PAC-I CD62P PE、CD61 的l％多聚甲醛lml，上机测试。 第二十三届航天医学年会暨第六届航天护理年会论文汇编 ·医学技术· 侧向角散射(SSC)、三色荧光(FLl一FL3)的检测信号均设置为对数放大，CD61PerCP／SSC双参数设门，分 别检测测定管与同型对照管中血小板群体的光散射及三色荧光强度，收集门内血小板数10000个，分析门内Fib-R (对照管GM)×Fib-R(对照管阳性率)X ×100％。 1．5血小板纤维蛋白原结合量检测 u 1．5．1标本处理取正常人全血(抽血方法同前)，测定组分别取450#全血与pH7．4的大白菜汁50l相混合： 对照组取450“1的全血与生理盐水50山相混合，混匀，立即放入37C孵箱15分钟。实验需三个测定管，分别为 抑制管(加入抑制物，抑制血小板与纤维蛋白原结合)、基础管(血小板与纤维蛋白原基础状态下的结合)及刺 激管(加入ADP、胶原后，刺激血小板与纤维蛋白原结合)，在抑制管中加入10va稀释液、5m抑制剂、5vl处 ADP(浓度40tttnoFl) 理后的全血；基础管中加入15m稀释液、5m处理后的全血；刺激管中加入10m稀释液、5m