人骨肉瘤U-2 OS细胞对甲氨蝶呤体外耐药机制的初步研究.pdfVIP

维普资讯 山东医药2008年第48卷第 17期 人骨肉瘤 U一2OS细胞对 甲氨蝶呤体外 耐药机制的初步研究 刘金超。李书忠’ (青岛大学医学院附属医院，山东青岛266003) [摘要] 目的 探讨人骨肉瘤细胞(U-2OS)对甲氨蝶呤(MTX)耐药的机制。方法 采用大剂量冲击与逐步 增加剂量相结合的方法，对U-2OS细胞进行诱导培养 ，建立4株耐药细胞株U-2OS／R1一U-2OS／R4。MTr法检测 并比较各细胞亚系对 MaX的敏感性，半定量RT-PCR法检测各亚系还原性叶酸载体 (RFC)、二氢叶酸还原酶(DH- FR)mRNA表达。结果 本实验成功建立了4株MTX耐药细胞亚系 ，即U-2OS／R1～U-2OS／R4；MTr法显示各亚 系耐药性逐渐增加 ，MaX耐药与RFCmRNA表达降低及DHFRmRNA表达增加相关(P0．05)。结论 RFC、DH— FRmRNA参与了U-2OS细胞的MaX耐药；测定RFC、DHFR基因状态有助于筛选MTX耐药的骨肉瘤患者。 [关键词] 还原性叶酸载体；二氢叶酸还原酶；甲氨蝶呤；骨肉瘤；耐药 [中图分类号] R738．1 [文献标识码] A [文章编号] 1002-266X(2008)17-0007-03 Pnman，studyonthemechanism ofMTX resistanceinosteosarcoma cellsU-20S HUJ 一chao。1JShu-zhong ( eAffiliatedHospitalofMedicalCollege，QingdaoUniversity，Qingdao266003，P．R．China) Abstract：Objective Toexplorethemechanismofmethotrexate(MTX)resistancein~teosareomacells(U-2OS)． Methods FourMTX—resistantvarinats(U-2OS／R1～U-2OS／R4)wereobtainedbyexposingparentalcelllinetohigh dosena dstepwiseincreasedMTX concentrationsinvitro．ThesensitivityofthecelllinetoMTXWaSmeasuredbyMTIas- say，theexpressionofreducedfolatecarrier(RFC)naddihydrofolatereduetase(DHFR)mRNAWaSassayde tIlRT-PCR． Results FourMTX—resistnatvarinatsweresucessfulyestablished，nadhteMTXresistnaceWaS aSs~iatde withtheincreaSe ofDHFRmRNAexpressionanddecreaSeofRFCmRNA (P0．05)．Conclusions TheexpressionofDHFRmRNAand RFCmRNA isrelatedtoMTXresistnaceinhumanosteosarcomacellU-2OS．SimultnaeousevaluationofRFC，DHFR gene statusmayhelptotheidentificationofpotentiallyMTX—resistnaceostoesareomapatients． Keywords：rdeucde folatecarrier；dihydrofolaterdeuctase；methotrexate；ostoesareoma；drugresistnace 甲氨蝶呤(MTX)是骨肉瘤的主要化疗药物 ， 基亚砜 (DMSO)、四甲基偶氮唑盐 (MTr)(Sigma公 MTX耐药现象是影响疗效 的主要原 因。研究表 司，美国)，MTX(浙江万马药业有限公司)，逆转录 明…，MTX为叶酸同类物，主要借助于还原性叶酸 及PCR试剂盒 (Takara公司)，GAPDH、DHFR、RFC 载体(RFC)进入细胞