猪沙波病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

’55· 2012年第六届南京农业大学畜牧兽医学术年会论文集 一————————————————————————————————————————一 猪沙波病毒抗体问接ELISA检测方法的 建立及初步应用 蒋静1，王 艳1，华修国2，陈 琰2，沈 权2 (1．上海出入境检验检疫局，上海200135； 2上海交通大学农业与生物学院，上海200240) min40min。选择无致癌的TMB为底物，确定 血清稀释倍数为1：50。试验选用1％BSA作为封闭液，血清和二抗的最佳作用时间分别为60 203。通过交叉试验、批内和批问重复性试验证明，本研 TMB最佳反应时间为lO。。。通过对20份猪阴性血清样品的检测，计算阳性判定值为0 究建立的SaV间接ELISA检测方法具有特异性高，重复性好的特点，可用于猪沙波病毒抗体的检测。 关键词：猪沙波病毒；间接ELISA；抗体 公司，TMB购自天根生化科技有限公司，其他为市 沙波病毒(Sapovirus，SaV)又名札幌病毒，属 售试剂。 嵌杯病毒科(Caliciviridae)，其原形为从日本Sapporo 地区一个婴儿之家暴发的腹泻事件中发现的病毒。 costar公司。 SaV是急性肠胃炎中主要的病毒性感染源之一，主要 ning 以粪便、口腔途径传播。 2方法 基于SaV的外壳蛋白核苷酸序列，SaV可以分为 2．1抗原浓度和血清稀释度的确定 5种不同的基因型(基因I、II、lII、IV和V型)。 采用矩阵滴定法，取96孔ELISA板，将抗原用 其中基因I、II、IV和V型感染人类，而基因III型 9．6的碳酸盐缓冲液倍比稀释，依次加入每行， 感染猪，猪感染SaY后表现以腹泻为主的肠胃炎症 pH 状。最近研究显示，在自然界中存在野生型由基因型 每孔100止，4℃过夜，次日弃去孔内液体，用 37℃封闭2h， 之间重组的SaV新毒株，而且有些毒株是由来源于 PBST洗涤3次。用1％BSA 150¨L／孑L，洗涤。将阴、阳性血清按1：25，1：50， 人的和猪的SaV重组而成。这提示SaV可能具有人 和猪之间跨种传播的能力，对人类的健康可能存在威 胁。杨世兴等2008年首次从上海和江苏两地规模化每孔100¨L，于37℃放置1h，取出后洗涤。然后 每孔加入100IxL的兔抗猪酶标二抗，于37℃作用 养猪场腹泻猪的粪便中分离到SaV，说明SaV已经存 1 TMB室温显色 在于中国养猪场，并已对中国的养猪业造成一定的威 h，随后洗涤，继而每孑L加入100IxL 10 2mol／L 胁和损失，做好对SaV的快速检测具有重要意义。 min，最后加入50