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黄曲霉毒素高暴露和体内HPRT基因突变频率升高 旷双远王金兵吴一迁万曙光朱源荣钱耕荪 上海市肿瘤研究所化学致癌研究室上海200000 江苏启东肝癌防治研究所启东226200 前 言 动物实验已经证明黄曲霉毒素是强致肝癌化学物质。流行病和分子流行病资料揭示黄曲 霉毒素和乙肝病毒具有协同致肝癌作用【1,2]。因此，黄曲霉毒素的监测是一项重要工作。目 前，通过检测人尿液中黄曲霉毒素代谢物和血液黄曲霉毒素白蛋白加成物来估计人体黄曲霉 毒素的摄入量和暴露量，这些生物标志物对确立黄曲霉毒素在人体肝癌病因和化学预防的研 究中是很有价值的【3，4j。然而，它们只反映了数日内和短时间内黄曲霉毒素的暴露水平，不是 反映黄曲霉毒素暴露的长期标志物，因此用于个体危险评估尚有局限性。耶I汀基因突变频 率是反映在受化学致癌物、致变物长期暴露后体内DNA损伤情况b，6J。体外研究中，人淋巴 细胞HPRT基因受黄曲霉毒素功击后外显子3的突变谱已经清楚，突变热点是外显子3上的 突变频率的关系的研究报道不多。我们的研究主要是探讨人体内黄曲霉毒素暴露量和体内 御RT基因突变频率的关系。 材料和方法 cellclonai J 一、T一淋巴细胞克隆测试(T assay)【8 1．10 液洗涤白细胞二次，离心、重悬、冷冻保存。。 RPMI 2．快速融化冷冻细胞，细胞悬浮液滴加到20Tnl含20％M3S1640培养液中，洗涤 离心后，细胞重悬，记数并稀释到1×10 h。离 心和洗涤后，细胞接种到96孔板，非选择板接种量为1，2，5或10个细胞吼。选择板量为1 mM mML 或2×104细胞吼。生长培养液由5％Ib牛血清，20％HL一1培养液，25HEPES，2 —gluatmine，100U／ml青霉素，10 ttg／rnl硫酸链霉素，适量TCGF，IL一2和0．125tJg／ml PHA。选择孔10_5M krad)TK6 feeder cells，总体积为O．2“。细胞孵育10-14d，在倒置显微镜下记录细胞数 lymphoblastoid 目。 二、AFB—ALBUMINADDUCI忑的放射免疫测定方法[9】 一10— 白蛋白试剂盒定量(溴甲酚紫染料结合法)。血清白蛋白经蛋白酶水解后，加入丙酮，离心去沉 淀，挥干丙酮水，PBS缓冲液溶解残余物。进行放射免疫测定。 三、I-IPRT基因突变频率的计算 突变频率=选择克隆效率月}选择克隆效率 结果和讨论 结果见表1： 毒素白蛋白加成物平均值是O．66 AFB／mg pmolAFBl／mgAlbumin，范围在0．27到1．19pmol Albumin。血液学测试、皿液化学测试、尿液分析和肝功能测试的结果表明参加者没有血液、肾 脏、肝脏疾病。 ， ADDUCTS平均值O．66 albumin 高值和低值。又根据队列J蚯B1一ALBUMIN pmolAFB／mg 为界线二分为高值和低值。 裹1-人体内黄曲霉毒素暴露和体内ItPRT基因突变频