农杆菌介导创伤胚转化的应用.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2015，43(3)：25—28 责任编辑 李 占东 责任校对 况玲玲 农杆菌介导创伤胚转化的应用 张丽君 ，刘龙龙 ，张建珍 ，孙毅 ，康国帅 ，周建平 ，崔林 (1．山西省农业科学院农作物品种资源研究所’农业部黄 土高原作物基因资源与种质创制重点实验室，山西太原030031；2．山西大学应用生物学研究所，山西太原030031；3．山西省农业科学院生物技术 研究中心．山西太原 030031) 摘要 [目的]优化农杆茵介导创伤胚转化的方法，提高转化率，培育具有特定功能的转基因品种 ，改善作物的生存能力和生态环境适 应力。[方法]参照农杆菌划胚介导植物萌发种子基因转化方法，以燕麦、玉米和高粱的萌发种子为试验材料，农杆菌菌株 LBA4404(含 质粒P3301ubiAc)侵染转化燕麦、玉米和高粱的萌发种子，优化转化条件，探索燕麦、玉米和高粱遗传转化体系，探讨菌液浓度、种子萌发 时间、超声波功率、乙酰丁香酮和草丁膦浓度对3种作物的影响并进行比较分析。[结果]农杆菌茵液浓度为0．60D ≥0．4时转化效 果最佳；第1次超声波功率为9O0W，处理时间为10min；第2次超声波功率为200W，处理时间为4min效果最佳。转化效率最高；添加 乙酰丁香酮对燕麦、高粱和玉米的发芽有明显促进作用，但转化效果有明显区别；燕麦、玉米和高粱的转化植株对草丁膦的耐受性差异 不大，与非转化植株相比，0．8mg／L除草剂胁迫下燕麦、玉米和高粱种子萌发受到一定程度的抑制。用1mg／L除草剂溶液对Tn和T 代转化植株幼苗进行筛选，转化植株的存活率高于对照。[结论]经除草剂筛选和PCR对 和 T．代幼苗检测，初步证 明获得 了转化 植株。 关键词 植物转化；燕麦；玉米；高粱 中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2015)03—025—04 TraumaEmbryoofGeneticTransformatlonSystem wlthAgrobacterium M ediatedM ethod ZHANGLi~un ，LIULong-long，ZHANGJian-zhen，CUILin etal (1．Cropgermplasmresourcesresearchinstitute，ShanxiA— cademyofA culturalSciences；KeyLaboratoryofCropGeneResourcesandGermplasm EnhancementonLoessP1ateau．MinistryofAgricul— tnre，P．R．China，Taiyuan，Shanxi030031；2．ResearchInstituteofAppliedBiology，ShanxiUniversity，Taiyuan，Shanxi030001) Keywords [Objective]Thepurposewastooptimizeagrobacterium—mediatedplantgerminationseedtransformationmethod，increaseconver— sionrate，breedGMvarietieswithspecificfunctions，andimproveviabilityandadaptabilityofcrops．[Method]Thispaperconsultedagrobac— terium-mediatedplantgemr ination seed transfomr ationmethodand selectedgemr inating seedsofoat．maizeandsorghum astestmaterials． Gemr inating seedsofoat，maizeandsorghum wereirifectedand transofmr edbyagrobacterium strain．which includedplasmidP3301ubiAc． TI_ansfomr ation conditionswereoptimized．Genetictransfomr ationsystemsofoat．maizeand sorghum werestudied．Concentration ofbacteri um，seedgemr inatingtime，