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第二届中华眼科中青年论坛论文汇编 角膜组织工程的进展 厦门大学眼科研究所厦门大学附属厦门眼科中心福建省眼科与视觉科学重点实验室(361005) 刘祖国李炜 2008年第二次全国残疾人抽样调查统计，中国目前共有视力残疾1691万人，其中角膜病致盲患者 约400万人。大部分角膜病致盲患者可以通过角膜移植手术而重见光明，然而，由于角膜供体的极度匮 乏，目前我国每年只能实施角膜移植手术3000余台。角膜组织替代物，亦即组织工程角膜的研制与应 用，将在很大程度上缓解角膜供体的供需矛盾，因此在我国受到越来越多的关注。 由于角膜组织具有特殊的组织学、力学、光学特性，组织工程全角膜的构建实际上是一个涉及多学 科的系统工程。基于目前的技术，构建类天然的组织工程全角膜还存在诸多问题。近年来，随着手术技 术的进步、医疗器械的发展，临床上角膜移植手术逐渐向成分角膜移植方向发展，即只移植患者角膜中 发生病变的上皮、基质或内皮部分。与此相应的，成分组织工程角膜的构建成为基础研究的主要发展方 向。如，组织工程角膜上皮，组织工程板层角膜基质，以及组织工程角膜内皮的构建。 目前我国有多个研究小组正在开展成分组织工程角膜构建的研究，在组织工程板层角膜基质、组织 工程角膜上皮方面均取得了积极进展，其中，组织工程角膜上皮已经进入临床应用。但是，成分组织工 程角膜的基础与临床研究仍然面临诸多挑战，解决这些问题不仅有助于成分组织工程角膜在我国早日实 现产业化并广泛应用于临床，而且有助于成功实施组织工程全角膜的构建。 一、组织工程角膜上皮 得益于角膜上皮干细胞生理研究的不断深入，组织工程角膜上皮的构建技术在过去十年得到了很大 发展。中国、日本、美国等多个国家已有采用体外扩增的角膜上皮干细胞移植治疗角膜上皮干细胞缺乏 的临床应用报道。但是，到目前为止，国际上还没有形成一个标准化的组织工程角膜上皮体外构建方法， 不同的研究组采用不同的方法，差异非常大，如在角膜上皮细胞取材方面，有用组织块培养方法，也有 用消化后的单个细胞培养方法；角膜上皮细胞培养载体方面，有用羊膜组织，交联的胶原膜，人类晶体 囊膜，温度敏感性材料等；在滋养层细胞方面，有用3T3细胞，也有不用滋养层细胞；在培养基方面， 有用含牛血清培养基，患者自体血清培养基，也有用无血清培养基；在培养环境方面，以前的研究均在 20％常氧环境下进行，最近发现2％低氧环境培养可以促进角膜上皮干细胞的增殖。我们认为，比较理 想的构建方案应考虑以下因素：①采用有利于干细胞体外扩增、便于手术操作、透明度好、组织相容性 好的培养载体：②由于异体或异种滋养层细胞有可能传播未知病原体，最好采用自体细胞作为滋养层细 胞或不用滋养层细胞；⑨异种血清同样存在生物安全性问题，建议采用无血清培养基或患者自体血清培 养基。总之，在临床推广之前，有必要对这些细胞培养的关键条件进行严格的对比评估，以优化出稳定 的、切实可行的构建方案。 组织工程角膜上皮移植主要用于治疗严重眼表面疾病引起的角膜缘干细胞缺乏，属于个体化治疗范 畴。为了避免移植术后的排斥反应，应尽可能采用患者的自体健眼角膜缘干细胞作为种子细胞构建组织 工程角膜上皮。对于双眼角膜上皮干细胞缺乏，有研究采用自体口腔粘膜上皮细胞作为种子细胞构建组 6 主题讲座 织工程角膜上皮。但是长期的临床随访发现，这种组织工程角膜上皮移植后角膜新生血管的发生率很高， 影响患者视力预后，并给增视性角膜移植带来困难。最近，有学者报道毛囊上皮干细胞在角膜缘基质细 胞的条件培养基中可以转化分化为角膜上皮样细胞表型，还有研究发现体外培养的人结膜上皮细胞可以 重建兔角膜表面。由此可见，种子细胞的筛选仍是未来组织工程角膜上皮研究的热点，对于非角膜上皮 来源的种子细胞，如何诱导其向角膜上皮方向分化，是组织工程角膜上皮基础研究所面临的主要挑战。 近年来兴起的体外诱导的多能干细胞(iPSc)研究或许也可以为自体来源的种子细胞带来新的选择。 理想的组织工程角膜上皮应该包含一定数量的角膜上皮干细胞，具有正常的增殖和分化能力，同时 不会向受体传播细菌、支原体、病毒等微生物。经过不同方法构建的组织工程角膜上皮应采用统一的质 量评价标准进行鉴定，如上皮干细胞所占的比例，上皮细胞的增殖能力，分化状态，以及生物安全性方 面的检测等。 我国有大量眼表化学／热烧伤引