鹿骨肽、龟板肽制备工艺的研究.pdfVIP

鹿骨肽、龟板肽制备工艺研究 中国保健科技学会多肽研究基地 饶邦福、季金林、张胜、张永丹、刘莉、于兰 摘要：受海南椰岛股份有限公司的委托，研究鹿骨肽、龟板肽的制备工艺．经过多次工艺实验 优化、总结出适宜于规模化生产的制备工艺，检测表明，龟板胶、鹿骨胶制备成鹿骨肽、龟板 肽，可以在保持龟板胶、鹿骨胶原有主要功效成分的基础上，提高溶解度，减少沉淀物，增加 澄清度，改善鹿龟酒的感官品质。 主题词：鹿骨肽、龟板肽，制备工艺。 一、研究目的 研究鹿骨肽、龟板肽的制备工艺。研究目的主要为将鹿龟酒中的主要原料鹿骨胶、龟板胶 经制各成多肽，提高溶解度，减少浑浊度及沉淀物，提高鹿龟酒的感官品质。 二、研究内容 筛选不同的酶制剂及其最佳酶解条件， 确定工艺条件及工艺流程，以适应规模化生产。 鹿骨肽及龟板肽的有关理化性能测定及工艺性能的比较。 确定鹿骨肽、龟板肽质量标准及检测方法。 三、研究工作简述 1、最佳酶解工艺的确定：在预实验获得单因素实验数据基础上，根据鹿骨胶及龟板 胶的特性筛选出复合酶1、复合酶2、复合酶3及风味蛋白酶四种蛋白质水解酶。本次实验研 究确定了两个四因素(即复合酶1、复合酶2为一组，复合酶3和风味酶为另一组，及两组酶的酶 解时间)及三个水平(即复合酶1及复合酶2组合中，设计三个不同水平的酶添加量及酶解时间： 以及复合酶3和风味酶组合中，设计三个不同水平的酶解时间及酶的使用量)的正交实验。根据 实验结果，优化生产工艺中最佳酶组合及工艺参数。 2、确定最佳酶的使用量及各自酶解时间等。为规模化生产提供了可靠的酶解条件及数据。 3、鹿骨肽及龟板肽各项技术参数及理化指标的检测及方法的建立。 (1)产品的主要标准及理化指标的确定及检测。包括性状、含水量、总氮含量、氨氮含量、 氮溶指数、澄清度、产品回收率等。 (2)分光光度法测定鹿骨胶及鹿骨肽，龟板胶及龟板肽在酒中浊度的方法。 G．25凝胶层析分析法的建立及不同分子 (3)鹿骨胶、龟板胶及鹿骨肽、龟板肽Sephadex 量范围的初步检测。 (4)鹿骨胶、龟板胶及鹿骨肽、龟板肽SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳方法的建立及其分子量 范围的检测。根据样品以小分子量多肽为主的性质，前后进行了几十次实验方案的调整和方法 改进，克服了小分子量样品分子量范围分布较广的特点，取得了显示两种肽的分子量范围电泳 图。 (5)鹿骨胶、龟板胶、鹿骨肽及龟板肽高效液相色谱法的测定。利用HPLC的高分辨率， 从不同范围分子量的混合物中检测出不同的峰值，每一个峰代表一个单～的多肽(或蛋白质)。 本课题用HPLC的反相色谱柱以2％乙腈为流动相，280nm紫外光下，对鹿骨胶、龟板胶及酶解 45 后的多肽进行色谱检测分析。 (6)农业部食品质量监督检测中心对产品氨基酸含量的测定。 四、研究结果 1、根据四因素三水平正交实验结果，最佳酶解工艺为复合酶1及复合酶2酶解方案。 下面是两个酶组在酶解鹿骨胶后的产品及原鹿骨胶的各种指标作一个比较 表1 ＼考衍 DH 产品回收率 蛋白质回收率 NSI 酶组、、＼ (X) (X) (X) (X) 原鹿骨胶 5．66 78 78 99．37 复合酶1+复合酶2 12．12 85．22 93．65 100．71 复合酶3+风味酶 10．84 73．33 80．26 101．77 从上表可以看出酶解前后产品的各种指标都有较大的变化，尤其是水解度的变化最为显著， 这说明酶解作用所起的效果能够将鹿骨胶与鹿骨肽很好的区分开来，另一方面，对复合酶1+复 合酶2、复合酶3+风味酶这两个酶组而言，除去误差项NSI，将其它各项指标作比较，前一个酶 组的酶解效果明显好于后一个酶组，由此，可以确定复合