体外去SUMO化体系的建立及应用.pdfVIP

第 31卷 第 2期 河南大学学报 (医学版) Vo1．31 NO．2 2012年 5月 JournalofHenanUniversity(MedicalScience) M av 2012 体外去 SUMO化体系的建立及应用 王岳 飞 (上海交通大学医学院 病理生理学教研室 ，上海 200025) 摘 要 ：目的 构建体外去 SUMO化 系统用于药物 筛选 。方 法 大肠杆菌表达人 Senp2催化活性结构域 即 Senp2C和 SUMO1化 的RanGAP1△c。结果 Ni 柱纯化获得有活力的酶 Senp2C和底物蛋 白质即RanGAP1 AC—SUMO1。结论 建立体 外去 SUMO化 系统 ，可筛选影 响去SUMO化 活性 的药物 。 关键词 ：Senp2；SUMO1；去 SUMO化 ；药物 筛选 中图分类号 ：Q78 文献标识码 ：A 文章编号 ：1672—7606(2012)02—0121—03 Establishm entand applicationofan in vitrodesumoylation system W ANG Yue—fei (DepartmentofPa 0p s0Z0g ，SchoolofMedicine，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai2OOO25，China) Abstract：Objective Tosetupinvitrodesumoylationsystem anduseittOdrugscreening．Methods Senp2Cwas produceandSUMO一1一conjugatedproteinRanGAP1△C inEscherichiacoli．Results Recombinantproteinswere purifiedbyNi columns．Conclusion Invitrodesumoylationsystem isestablishedsuccessfulanditcanusedindrug screening． Keywords：Sentrin-specificprotease2；SUMO一1；Desumoylation；DrugScreening 小泛素相关修饰 因子 (smallubiquitin—related SENPs(Sentrin—specificproteases，SENPs)的蛋 白 modifien，SUMO)化修饰是蛋 白质翻译修饰 的一种 酶行使着重要的功能：①切除 SUMO前体 c一末端 的 重要形式。成熟形式 的SUMO通过特定的 SUMO 几个氨基酸残基 ，以暴露 c一末端的双 Gly残基使之成 化酶的作用，SUMOs的甘氨酸尾 巴可以和被修饰蛋 为具有修饰、转运等功能 的成熟 SUM0。②将 SU— 白质特定位置上赖氨酸残基 的 ￡一氨基连接形成异肽 MO-底物蛋白质复合物水解成 SUMO和底物 ，这个 键，对 目标蛋 白质进行 SUMO化修饰[1_3_。 目前为 过程称为去 SUMO化。哺乳动物 中 SENPs家族 由 止 ，研究发现可 以被 SUMO化修饰 的蛋 白质已经有 6个成员组成，它们都属于半胱氨酸蛋 白酶家族 ， 很多 ，这些蛋白质有 2／3是转录因子或转录因子的辅 Senp2(Sentrin—specificprotease2，Senp2)就是其 中 因子 。除转录调控功能外 ，另外发现的SUMO化蛋 的一种，它能够催化大量蛋白质去 SUMO化 ，同时具 白质还有参与发育、细胞生长分化、蛋 白质核质转运、 有极高的内肽酶活性 (使 SUMOs成熟)[7-8]。 核糖体生成、DNA修复等生理进程[4]。 对于 sENPs酶活性 (内肽酶、异肽酶)的研究有 SUMO化修饰在体 内是一个动态可逆 的过程 ， 不少 的报道 ，也有多种的检测体系。我们实验室应用 SUMOs首先是被切除羧基末端多余氨基酸序列露 原核表达SUM0化的蛋 白质和Senp2催化活性结构 出Gly—Gly尾 巴，然后被连接到靶蛋 白质上形成 SU— 域，建立体外去 SUMO化体系，研究体外条件下对 MO化的 目标蛋 白质 ，最后 SUMO又可以从被修饰 S