纤维蛋白染色法在肾活检病理学诊断中的作用.pdfVIP

维普资讯 维普资讯 · 488 · 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol2007Aug；23(4) 显色原位杂交技术在检测ES／pPNETs染色体易位上的应用 蒋金芳，李洪安，李 锋，常 彬 关键词：Ewing肉瘤／Jb周原始神经外胚层瘤；原位杂交；染 (1)脱蜡至无水乙醇冲洗，空气 中干燥；(2)预处理：切片经 色体易位 热预处理和酶消化 ，蒸馏水冲洗，2min3次；切片浸泡在0． 中图分类号：R730．262；R392．4 文献标识码 ：B 1％的DEPC溶液中15min，蒸馏水冲洗 ，梯度乙醇脱水，在 文章编号：1001—7399(2007)04—4088—02 空气中干燥；(3)变性和杂交 ：在每张切片上滴加20 地高 辛和生物素标记的SpoT—Light易位探针的杂交混合液，并加 显 色原位 杂 交法 (chromogenicinsituhybridization， 盖玻片；切片水平放置到染色架上，放人加热的烧杯中，烧杯 CISH)作为一种核酸原位分子杂交技术方法，在普通光学显 中的水只需 100ml左右，烧杯上加盖，并在其中间插一个温 微镜下原位检测基因的扩增、染色体易位和异倍体分析。本 度计以测量烧杯中蒸汽的温度，杂交温度控制在 95℃左右， 实验室用显色原位杂交的方法检测常规福尔马林固定、石蜡 变性 10min；迅速放入湿盒中置于37℃温箱 16～24h；(4) 包埋 ES／pPNETs组织中22号染色体上特异性 EWS基 因易 按试剂盒要求冲洗 ；(5)免疫检测：切片需过氧化物酶灭活 位 ，现将该技术对检测染色体异位方面的方法和体会介绍如 下 。 和CAS—Block(试剂A)的封闭，弃去 A液；每张切片各加一 滴 (50 1)或适量的Ap—Anti—Digoxigenin(试剂 B)和 HRP— 1 材料与方法 Streptaridin(试剂 C)混匀后室温孵育 30—60min后 ；切片浸 1．1 材料 选择石河子大学医学院一附院及新疆 自治区人 入含 0．025％Tween20的 PBS溶液泡洗，2min3次 ；每张切 民医院病理科的石蜡组织，切片厚度为3～4 m，APES处理 片加3滴(150 )或适量的DAB溶液，室温孵育3Omin，盖 玻片，切片置 60℃烘烤2～4h。由经验丰富的病理医师根 上盖玻片镜下观察结果满意，移去盖玻片，自来水浸洗，2～3 据HE切片并结合免疫组化确诊的ES／pPNETs，32例骨外 min；加3滴 (150Ix1)或适量 的FastRed显色液，室温 10 ES／pPNETs中选 l5例运用 CISH技术检测 EWS基因的易 min，盖上盖玻片镜下观察结果满意，移去盖玻片，自来水浸 位。对照肿瘤腺泡型横纹肌肉瘤 1例 ，每例均设阴性对照。 洗2rain；切片浸入苏木精溶液 5～60s，自来水浸洗2～3 1．2 试剂 SpoT-LightEWS肉瘤易位探针对和EWS肉瘤 min；切片上均匀滴加试剂 F(Clearmount)，60℃ 1．5—2h， 易位检测试剂盒为美