兔膝骨关节炎动物模型的构建.pdfVIP

山东医药2008年第48卷第 39期 兔膝骨关节炎动物模型的构建 朱长谋，吴 剑，鲍同柱 (宜昌市中心人民医院，湖北宜昌443002) [摘要] 将 15只实验兔随机分为对照组(7只)与实验组 (8只)。对照组打开兔左膝关节腔后，不作任何处理， 缝合切 口；实验组切断兔左膝前交叉韧带、摘除内侧半月板，缝合切 口。术后第 8周 ，对照组膝关节未出现x线改 变；实验组膝关节出现X线改变，且其血清 IL-1、基质金属蛋白酶 13(M~W-13)、I 1_a明显高于对照组(P0．01)。 认为通过切断膝前交叉韧带、摘除内侧半月板复制骨性关节炎模型操作简单、损伤小，保留了膝关节的部分稳定性 且模型复制成功所需时间短，有利于动物模型复制。 [关键词] 骨性关节炎；造模法 [中图分类号] R285．5 [文献标识码] B [文章编号] 1002．266X(2008)39．0030-02 骨性关节炎(on)是一个多病因、发病机制复杂 常，关节面平整光滑，关节边缘整齐规则无骨赘，关 的常见病，目前各种 OA动物模型制作方法周期长、 节内无游离体，软骨下骨密度分布均匀。实验组造 操作复杂、损伤大。寻找一种理想的造模方法是研 模后 8周关节内侧间隙明显狭窄，关节面粗糙变形， 究膝OA的关键所在。2008年 3月，我们采用膝前 关节边缘有骨赘形成，软骨下骨密度明显增高。 交叉韧带切断、内侧半月板摘除造模法复制作 OA 2。2 光镜观察结果 对照组关节软骨表面光滑，四 动物模型。现介绍如下。 层结构清晰可辨，软骨细胞排列整齐呈柱状，细胞核 1 材料与方法 清晰，染色均匀，潮线完整，软骨基质分布匀称；实验 1．1 动物及分组 健康6个月龄新西兰大 白兔 l5 组关节软骨层变薄、粗糙，四层结构不易辨认 ，部分 只(雌雄各半，重 1．8～2．5kg)，随机分为对照组 (7 区域软骨细胞核固缩、裂解、坏死，偏于一侧，钙化层 只)、实验组(8只)。 软骨细胞呈簇状堆积，排列紊乱，潮线多不规整或完 1．2 方法 对照组取膝关节 内侧人路，打开关节腔 全消失，甚至软骨下骨质外露、软骨下骨囊性变。 后逐层缝合；实验组取兔膝关节内侧人路，切断前交 2．3 透射 电镜观察结果 对照组软骨细胞呈椭圆 叉韧带，摘除内侧半月板。术后各组动物连续 5d 形，表面为绒毛较多，包膜及胞核完整，胞质 内可见 肌肉注射青霉素20万 u／只。术后第 8周拍摄兔双 丰富粗面内质网、高尔基体、线粒体，且内含丰富微 膝正位 x线片。两组动物于胭静脉取血，收集血 丝，排列成束状，细胞核染色质分布均匀。实验组软 清，ELISA法检测 IL-1、TNF．a和基质金属蛋 白酶 骨细胞明显固缩且外形不规则，细胞周晕消失，核膜 (MMP)13水平。取股骨 内侧髁关节软骨 5nⅡn×5 不明显，表面微绒毛突起减少，胞质内细胞器凝成高 lL／rn×5mln，固定、包埋、切片，行 HE染色 ，观察关节 电子密度的片状物，微丝消失，细胞核形状不规则， 软骨的层次、软骨细胞及软骨下骨的变化。取股骨 染色质浓聚散裂于核中。软骨细胞表面表面突起增 内侧髁 中央软骨 1mm×1nqrn×3lnna，超微切片，透 多增大，周围出现空隙，胞核固缩，胞质内有大量脂 射电镜下观察关节软骨细胞超微结构 细胞器结构的 滴及空泡出现，包膜破损，甚见软骨细胞裂解成碎 变化情况。取股骨内侧髁关节软骨 5mnlX5iTlna×5 屑。 1／!I／1，固定、包埋、切片，免疫组化 sP法检测 Bc1．2与 2．4 实验组血清中IL-1、软骨 Bcl一2、，INF_a免疫组 TNF-a的表达。取关节囊 内侧滑膜 5nqm×5ml／1×5 化检测结果 见表 1。 mm，固定、包埋、切片，免疫组化 sP法检测 IL-1表达。 2．5 两组血清中IL-1、TNF—a、MMP-13检测结果 1．3 统计学方法 采用S