体内转染Ad／CMV—hTGF—β1对兔椎间盘髓核细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响.pdfVIP

维普资讯 山东医药2008年第48卷第 17期 · 基础研 究 · 体 内转染Ad／CMV—hTGF—p1对兔椎间盘髓核 细胞凋亡及 Bcl一2、Bax表达 的影响 季爱玉，于腾波，袁万青，王树春 (青岛大学医学院附属医院，山东青岛266003) [摘要] 将 15只纯种成年新西兰大白兔随机分为三组各5只，均腹外侧手术人路，找到椎间盘。实验组分别 于 — 、 —L6椎间盘髓核内注射以腺病毒为载体的Ad／CMV-hTGF-p120 ，实验对照组注射磷酸盐缓冲液 20 ，正常对照组椎间盘未做任何处理。术后3周取椎间盘，观察各组髓核组织细胞凋亡及Bel-2、Ba】【表达情况。 结果与其他两组比较，实验组椎间盘髓核组织凋亡细胞明显减少 ，Bel-2表达增加，Ba】【表达降低。提示TGF-B1可 通过促进 Bd-2蛋白表达 、抑制Bax蛋白表达，有效阻止椎间盘髓核细胞的凋亡。 【关键词] 细胞凋亡；Bcl-2；Ba】【；腺病毒载体；人转化生长因子；髓核细胞 [中图分类号] R681．5 [文献标识码] B [文章编号] 1002~66X(2008)17-0036~2 研究显示，细胞凋亡在椎间盘退变过程发挥重 间盘不做任何处理。依次关闭切 口，术后3周处死， 要作用。2006年7月 一2007年 1O月，我们采用腺 取出相应椎间盘，常规石蜡包埋切片。采用免疫组 病毒载体 Ad／CMV．hTGF．61转染纯种兔腰椎间盘 织化学染色法检测髓核细胞凋亡情况 (POD法，试 髓核细胞，观察其对髓核细胞凋亡及其调控蛋白 剂盒由Roche公司提供)及 Bcl-2和 Bax蛋 白表达 Bcl-2、Bax的影响，旨在为椎间盘退变的基因治疗提 情况(TUNEL法，试剂盒由SanmCruz公司提供)， 供依据。 均采用显微图像分析系统(VIDAS)测定椎间盘髓核 1 材料与方法 内免疫反应产物的平均积分光密度值(OD值)。所 将 15只纯种同龄成年新西兰大白兔 (雌雄不 得数据采用 SPSS10．0统计学软件行单因素方差分 限，体质量2．0—2．5kg)随机分为三组各5只，均行 析，检验水准 =0．05。 腰椎侧前方倒八字人路，于腹膜外进入腰椎侧前方， 2 结果 找到椎问盘。实验组分别于L4一L5、L5一L6椎间盘 各组髓核组织细胞凋亡及 Bc1．2、Bax表达情况 髓核内注射以腺病毒为载体的Ad／CMV-hTGF．61； 见表 1。 实验对照组注射磷酸盐缓冲液2O ；正常对照组椎 表 1 各组髓核细胞凋亡及Bel-2、Bax表达情况 (OD值。i± ) 注：与正常对照组比较，’P0．05；与实验对照组比较，P0．05 3 讨论 了跨膜片段的Bc1．2不能定位于线粒体膜上，并丧 研究证实，不论是否发生椎间盘突出，随年龄增 失抑制细胞凋亡功能。Bax由192个氨基酸组成， 长椎间盘均有大量细胞凋亡…。本研究与之相符。 基因产物蛋白相对分子质量为21kD，21％的氨基 有报道认为，细胞凋亡是受细胞内源性基因、酶类和 酸与Bc1．2同源，生物学作用是拮抗 Bcl-2。Bax．Bax 信号传导途径调控的一个 “瀑布式”激活过程。Bc1． 同源二聚体可促进细胞凋亡；Bax—Bc1．2异源二聚体 2和Bax即是影响细胞调亡发生的重要蛋 白。Bc1．2 使细凋亡还是生存取决于二者比值，Bax占优势时 蛋 白位于核膜、粗面内质网和线粒体膜上，其跨膜单 细胞凋亡，Bcl-2占优势时细胞存活 J。 位与其在细胞内的定位密切相关。研究发现，缺失 研究发现，退变的椎间盘细胞TGF．61表达下 36