3食品微生物快速检测技术的研究进展.pdfVIP

·52 · 河北农业科学 2008年 免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色 别微生物 。该法可以解决抗体检测的特异性问题 , 但需 ( ) ( ( ) 素标记在抗体 或抗原 上 , 与其相应的抗原 或抗 要相对大的样本量 10 000 ～100 000 个细菌 , 才能获 体 ) 结合后 , 在荧光显微镜下呈现 1种特异性荧光反 得明确的结果 。因为样品中含大量的非特异微生物会干 应 。可用来对沙 门氏菌、李斯特菌 、葡萄球菌毒素 、 扰杂交结果 , 所以在食品微生物方面主要是利用琼脂平 E 1Coli O 157 和单核细胞增生李斯特 氏菌等进行快速检 板上的细菌菌落进行杂交 。 测 。王军等 [ 5 ]建立了养殖大黄鱼病原溶藻弧菌的间接荧 5 12　PCR 光抗体免疫快速检测技术 。该技术的主要特点是特异性 5 12 11　常规 PCR 　PCR 往往从单个的 DNA 或 RNA 序 强、敏感性高、速度快 。但还存在不足 , 如非特异性染 列开始 , 通过扩增可以合成 10 亿以上的 DNA 序列 。根 色问题尚未完全解决 , 结果判定的客观性不足 , 技术程 据特异性的细菌在分类单元中的不一致性及其与其他分 序比较复杂 。 类单元之间的遗传进化距离来鉴定 。 3 12　酶联免疫吸附技术 ( EL ISA ) 但利用 PCR 对食品进行常规检测时也存在如下问 酶联免疫吸附技术是将抗原或抗体吸附于固相载 题 : 过程比较复杂 ; 不能区分有活性和没有活性的细 体 , 在载体上进行免疫酶染色 , 底物显色后 , 通过定性 菌 , 而对于食物中致病菌 , 需要检测的是有活性的细 或定量分析有色产物量 即可确定样 品中待测物质含 菌 ; PCR 反应是 1种灵敏度很高的酶学反应 , 但是在检 量 [ 6, 7 ] 。它结合了免疫荧光法和放射免疫测定法 2 种技 测食品中的致病微生物时 , 食物的成分 、培养基和 DNA 术的优点 , 具有可定量 、反应灵敏准确 、标记物稳定、 提取液都可能降低其灵敏度 , 所以 PCR 主要用来对琼 适用范围宽、结果判断客观 、简便完全 、检测速度快以 脂平板上的纯细菌或菌落进行鉴定 。 及费用低等特点 , 可同时进行上千份样品的分析 。Tsai 5 12 12　定量 PCR 　常规的 PCR 方法只能得出定性的结 等 [ 8 ]用 EL ISA 对奶酪和酸牛奶中的杂色曲霉 、多主枝 果 , 从而限制了其应用 。随后发展的是定量 PCR 技术 , 孢 、白地霉 、卷枝毛霉和产黄青霉进行了检测 。 包括与 M PN 相结合的非直接定量 PCR 和直接定量 PCR 。 3 13　酶联荧光免疫吸附技术 (V IDA S) M PN 2PCR 方法是将传统的 M PN 计数方法和 PCR 方法相 酶联荧光免疫分析技术将酶系统与荧光免疫分析结 结合 , 对样品中的靶细菌进行半定量 。非直接定量 PCR 合起来 , 在普通酶免疫分析的基础上用理想的荧光底物 还包括非竞争性定量 PCR , 是通过对同一反应管中的靶 代替生色底物 , 可提高分析的灵敏度和增宽测量范围, 基因和另一段无关的内标序列 (如管家基因 ) 同步扩 减少试剂的用量 。酶放大技术 、固相分离及荧光检测三 增进行的, 通过内标产物对靶序列产物进行校正 , 从而 者的联合将成为荧光免疫分析中最灵敏的方法 。陈思 得出相对的定量值 。定量 PCR 不需要增菌 ,