同种血管深低温保存研究进展.pdfVIP

·142· Clinicaland Medicine Journal ExperimentalV01．8，No．8Al移2009 of 同种血管深低温保存研究进展 张文霞1 刘典晓2’ 董圣军2刘建伟2 (1滨州职业学院医学系山东 滨州256600； 2滨州医学院附属医院胸心外科 山东 滨州 256603) 【关键词】 同种异体血管 深低温保存技术研究进展 随着现代心血管外科的发展，很多复杂的先天性心脏病手术 存在，在复温过程中，使热量交换不均匀，外周组织内冰晶融化可 需应用同种异体血管，深低温保存技术是血管保存的有效方法， 从内部吸收热量，使内部组织再结晶加重，可造成细胞严重的机 本文就目前深低温保存同种血管的现状做一综述。 ’ 械性损伤。另外，低温蛋白质的变性，脂质的丢失，细胞膜通透性 1取材与制备 的改变以及细胞膜上小孔的形成，使水分子易通过细胞膜，引起 1．1 热缺血时间 热缺血时间是指供体失去血液供应到在 细胞水肿，超过一定时间或程度时，细胞便会破裂。不同的复温 0—4℃保存之间的时间，一般不超过4h。热缺血时间是决定 速率对血管组织均有破坏，复温速率也应根据组织不同而不同。 供体活性的重要因素。热缺血时间越短，越有利于保持供体 37℃或40℃恒温水浴箱快速复温法复温速率不均匀，细胞再结 的活性。随热缺血时间延长，血管损伤加重，内皮细胞坏死， 晶重，高水负荷状态持续时间长，细胞损害重。在复温过程中控 脱落增多。即使4。C保存超过24h，血管的组织力学较新鲜 制复温速率，采用4。C／min的复温速率对主动脉瓣活性影响最 血管也明显下降…。 1．2灭菌 目前对血管灭菌主要有两种办法：一种是抗生素 升温时对复温后脐静脉收缩性能影响最小旧J，近年来兴起的玻 法拉J，将血管置于含一定浓度抗生素的营养液中，4。C冰箱中过璃化冷冻是血管保存的重大进展。玻璃化法是一种快速冷冻法。 渡后置液氮中冻存以达到清洁目的。另一种是无菌操作法，即在 活细胞在冷冻过程中，完全避免冰晶形成产生玻璃化固化的过 整个保存过程中，严格无菌操作达到清洁目的。 程。与慢冷冻法相比其优势在于冷冻过程是在瞬间完成的，通过 2冻存 迅速降温，形成透明的玻璃状固体，黏度很高，但细胞内无冰晶形 2．1 冷冻保护液冷冻保存能有效地维持血管组织的基本结构 成，从而减少了冷冻过程中渗透压和激冷对细胞脂质膜及细胞骨 和功能，但是冷冻过程中，细胞周围冰晶形成，大量离子析出，细 架结构的损伤，保留细胞内外液体正常的分子和离子分布。 胞外的高渗状态造成细胞的脱水死亡。目前常用的方法是在营 影响玻璃化冷冻效果的因素主要包括：①冷冻保护剂。细胞 养液中加入一定浓度的冷冻保护剂，此类物质通过与细胞内水分 外冷冻保护剂一般采用大分子物质，如多糖类(蔗糖、海藻糖)、 结合，减轻细胞内脱水。目前常用的冷冻保护剂是甘油和二甲基 剂为具有良好穿透性的小分子物质，如二甲基亚砜、乙二醇和丙 亚砜(DMSO)。DMSO浓度对组织活性及组织的热应力影响较 明显【3 二醇一J。冷冻保护剂毒性也是人们对玻璃化冷冻担心的主要问 J。目前认为浓度为15％的DMSO对血管保护作用最佳， 浓度低于最佳浓度，保护作用不充分；而浓度过高也会使毒性作 题口J。所以用于此法的保护剂必须通过严格筛选和配制。此外 用增强，破坏了血管的结构和功能。浓度为15％时保存的血管 缩短平衡时间和降低平衡时的温度也能减少其毒性作用。②温 组织平滑肌细胞内可见少量空泡，但胶原纤维排列基本正常HJ， 度下降速度。降温速度越快越好，直接沁入液氮的方法，降温速 大部分内皮细胞保存完好，浓度为10％或30％时血管内皮细胞、度约为2 平滑肌细胞胞内结构及内皮细胞完整性均破坏明显。但DMSO000℃／rain；③组织载体。对组织载体的要求是组织周围的冷冻 有利于钠离子进入组织细胞内对细胞产生损害，在溶液中用维生 保存剂体积应尽量小，与液氮间隔尽量少，操作简便，目前常用的 素B复合体取代钠盐可阻止DMSO发挥其毒性作用，平滑肌细有：Cr