多西紫杉醇对卵巢癌HO-8910细胞的增殖抑制及诱导凋亡的研究.pdfVIP

中国药物与临床2009年5月第9卷第5期ChineseRemedies＆Clinics，May2009，Vo1．9，No．5 · 4JD1 · 多西紫杉醇对卵巢癌HO一8910细胞的 增殖抑制及诱导凋亡的研究 吴 娟 邵淑丽 多西紫杉醇(OTX)是一种广谱的、半合成紫杉类抗肿瘤 2。1 形态学观察：光镜下观察多西紫杉醇5．97~sm／l(42 h 的化疗药物。已有研究表明，多西紫杉醇可用于治疗多种癌 IC∞)处理48h后细胞的病理改变有：细胞体积缩小，胞质嗜 症如乳腺癌、肺癌、胃癌和头颈部癌等。本实验通过研究不同 碱性，核染色质固缩致密或者核染色质断裂．形成大小不等 浓度多西紫杉醇在不同时间对卵巢癌HO一8910细胞增生的 的胞内核小体。部分细胞核膜消失，核染色质聚集在细胞中 抑制作用和凋亡的诱导作用及一些形态学的改变．为多西紫 央，胞质略嗜碱性，呈现分裂期的形态学表现。随着作用时间 杉醇临床应用于卵巢癌的化疗提供理论依据。 的延长，核浓缩靠边的细胞增多，并出现核裂解形成凋亡小 1 材料和方法 体。 1．1细胞及试剂 2．2 MTY测量 ：多西紫杉醇对卵巢 HO一8910细胞的生长抑 人卵巢癌细胞株HO一8910(山西医科大学中心实验室提 制作用：1～80t,eCml的多西紫杉醇分别作用 12、24、48、72h 供)，RPMI一1640培养基(Gibeo公司)，小牛血清(华美生物公 后，对肿瘤细胞生长抑制率见表 l，结果表明：①随浓度增加， 司)，胰蛋白酶(吉诺生物医药技术有限公司)，多西紫杉醇 细胞存活率降低，有明显的浓度依赖关系。②24h后，2~s／na (罗纳德普朗克乐安公司)，噻唑蓝(MTr，华美生物公司)，二 以上浓度的多西紫杉醇具有明显抑制细胞生长的作用。③48 甲基亚砜 (DMSO，上海)。 h后最低抑制浓度为 1~gCml。随时间的延长，药物的敏感性 1．2 细胞培养及分组 增加。 人卵巢癌细胞株HO一8910培养于 10％的小牛血清RP_ 表 1 各浓度多西紫杉醇不同时间对细胞生长的抑制率(％) MI一1640培养基中，培养箱37℃含5％湿饱和的CO：培养箱 中培养。取处于对数生长期细胞进行试验 ，以锥虫蓝染色法 记数活细胞数计算细胞活力，细胞活力在95％以上者进入正 式试验。多西紫杉醇按不同浓度和不同作用时间进行分组． 设不处理组为空白对照组，每组设立6个复孔。 lI3 方法 1．3．1 显微镜观察：细胞经多西紫杉醇处理后，定时用胰蛋白 酶消化收集 ，细胞离心涂片，甲醇室温固定，Wright—Gienlsa染 色3min。光镜观察。 1．3．2 MTr法测细胞生长抑制率：取对数期生长细胞，分别 加入不同浓度多西紫杉醇 (1、2．4、6、10、20、40、80~s／na)于 12、24、48、72h后MTF法测定吸光度值。每板设空白对照组。 2．3 流式细胞仪分析 ：给予 HO一8910细胞5．97p,gm／l(24h 细胞增殖抑制率％=[1-(实验组平均吸光度值，空白对照组平 Ic∞)多西紫杉醇，作用 12、24、48和72h后流式细胞仪分析． 均吸光度值)]x100％。计算药物作用 24h的Ic∞值，根据 结果见表2。随着作用时间的延长，G2／M期的阻滞也逐渐明 MicrosoftExcel软件给出的相应公式求出抑制50％细胞生长 显，但即使 G2／M期阻滞刚达到高峰时(作用42 h)，也不出现 的药物浓度，即Ic卯值[。 明显凋亡现象(亚Gl峰)，与对照组相 比差异无统计学意义 1．33 流式细胞仪分析细胞周期及检测凋亡率：收集IC∞(42h) ( ．05)；作用时间延长到48h或72h，即G2／M完全阻滞后 多西紫杉醇作用 12、24、48、72h的细胞及空白对照组细胞 。 42 h或48