小鼠胚泡注射TCM-199溶液的实验.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing） 3(4) 15-161981 小鼠胚泡注射TCM-199溶液的实验 王培生 李树英 魏钧 （中国科学院遗传研究所，北京） 哺乳动物中卵的显微操作技术是研究细胞 (70%)0.48m1，牛血清 20m1，青霉素7.5mg, 分化、细胞器之间相互作用及基因调控的重要 链霉素5mg,pH7.2o 方法之一。卵显微注射是显微操作中一项较为 （三）注射步骤 将注射微管和持卵微 困难的技术。1966年Lin(2,31对小鼠原核潮卵 管分别固定在显微操作器的两侧，在解剖镜下 注射柠檬酸盐一洛克氏液，1973年19［1又对小鼠 将两支微管调整到一直线上。然后使微管首先 胚泡注射锥虫兰溶液，均获得发育正常的小鼠。 接触到卵穴中石蜡油的顶部，再使微管的尖部 国内尚未见报道。 慢慢地进人石蜡油下的注射液中。利用持卵微 我们的试验主要是将 TCM-199溶液注射 管的负压将卵牢牢地吸住。注射微管的前端吸 于胚胎内，观察对胚胎有无损伤作用，并检验胚 人注射液，然后慢慢推进，使微管尖穿过透明带 胎注射技术是否成功，为今后开展这方面的研 和卵黄膜，进人胚泡腔，再将 1,400犷 (1声＝ 究创造条件。 10-9z11)TCM-199溶液注人腔内 （图1)0 材 料 和 方 法 一（）微管和卵穴的制备 在哺乳动物 卵显微注射中，注射和固定卵所用的微管是采 用拉针器拉制的，即将外径约为 1mm的玻璃毛 细管拉成孔径大约1-2,u，外径为2-3g。固 定卵用的持卵微管则在微灯上用手工拉制，孔 径大约为 15tz，外径约为 70,ua 卵穴是显微注射时放卵用的，采用 1.5mm 厚的凹孔玻璃片，孔内放一小滴注射液，注射液 上覆盖石蜡油。 （二）卵和注射液的制备 将黑色C57BL, 野灰色C3H/Hemg品系雄鼠分别与昆白品系 雌鼠杂交。黑色、野灰色对于白色均为显性。在 母鼠接受交配后的第 3夭，用 2m1TCM-199 图I 小鼠胚泡显微注射图示 溶液分别冲洗两侧子宫角采集胚泡W。把形态 1．注射管顶部和持卵管保持在一条直线上：2．持卵 正常的胚泡放在卵穴中央的注射液中，以进行 管将卵吸牢：3．注射管穿过透明带： 4．注射管穿 过卵黄膜进人旺泡腔内：5.注射后将注射管撤回。 显微注射。 注射液：每100m1含有TCM-199980mg, WangPeishengetal.:DevelopmentofMouseEmbryo 丙酮酸钠 55m9,碳酸氢钠 100mg，乳酸钠 afterInjectionofTCM-199Fluid 15 表 I 小限胚泡注射和不注射移植的结果 2．小鼠胚抱显微注射后大 约有 15-20贻 移植 受体数 妊 娠 发 育胚 胎 胚泡发生破裂。受注射的卵和只刺穿而不注人 实 验 组 合 旦p数 受体数胚胎数成活率 个（） （只） （只） （只） （％） 溶液的卵的成活率并无显著差异，这说明，主要 对照组’） 91 15 11 54 59.3 是刺穿而不是注入溶液影响了部分卵的正常发 注射 1,400N3 育。未经任何处理的卵的成活率则较高。 TCM-199液 110 23 13 斗4 40.0 3．在小鼠胚泡显微注