化肝通络方对原发性胆汁性肝硬化的抗纤维化作用及机制探讨.pdfVIP

也仅仅对部分患者有效。因此我们在临床工作中，通过中医辨证论治的研究总结了验方化肝通络方， 用于临床治疗当中，取得较好疗效。为了对化肝通络方的疗效进行科学的评价，本文通过动物实验 研究了其对胆汁性肝纤维化大鼠的治疗作用。 1材料 1．1材料 由江苏省中西医结合医院提供。ct-SMA TIMP-1 China(LotNo291100)、ICAM．1 ELISA测定试剂盒：RD ELISA测定试剂盒： Systems RD China(LotNo295330) Systems 1．1．2动物：实验用动物：清洁级SD大鼠84只，全雄，体重180-a：209。 1．1．3主要仪器 全自动生化分析仪：日本日立公司；光学显微镜：日本Olympus公司；自动放射免疫计数机： centrifuge 中国科学技术大学中佳公司：台式高速冷冻离心机：Eppeadorf5417R，Germany产品。 2方法 2．1．动物模型的造模方法：取72只大鼠标号后，随机分为12只假手术对照组与60只胆管结扎 组；大鼠予10％水合氯醛溶液(300mg／kg)腹腔注射麻醉后，沿腹正中线开腹，找到并暴露胆总管， 假手术对照组仅分离胆总管后关腹；模型组在肝门部胆管周围的近端结扎胆总管后，常规关腹。术 后连续3天注射青霉素40万u／，只，正常喂养。 2．2给药：造模一周后，过夜禁食眼眶静脉取血检测肝功判断是否造模成功，然后将模型组中 胆汁性肝硬化模大鼠(BDL)分为模型对照组，化肝通络方高、中、低剂量组，阳性药(熊去氧胆 酸)，假手术组对照。评估造模成功后，每日灌胃1次，共4周。按生药量计算给药剂量，化肝通 混浊液58．3mg／kg／d。模型对照组及假手术对照组灌等体积的生理盐水。 2．3指标检测： 2．3．1动物一般情况的观察和体重的比较 每日观察大鼠生长、进食、毛色、粪便、活动、死亡情况。每周称量并记录各大鼠体重。 2．3．2肝功能：按照南京建成生物工程研究所试剂盒的方法检测血清白蛋白(Alb)、总胆红素 (TBil)、舢．一T、AST、1，一谷氨酰转肽酶(GGT)及碱性磷酸酶(ALP)。 2．3．3肝组织学观察：肝组织经4％中性甲醛固定，石蜡切片，按常规方法行HE染色，光镜下 观察肝组织的病理变化。 2．3．4血清采用酶联免疫吸附测定(ELISA)测定Q．SMA、金属蛋白酶组织抑制因子．1抗体 (TIMP．1)，细胞间粘附分子(IC√蝴．I)。 2．3．5肝组织TGF．131、Smad3、Smad7表达测定S．P法免疫组织化学染色。 2．4统计学处理 数据用表示，各组均数之间比较采用SPSSl0．0统计软件进行方差分析及组间t检验统计结果。 P0．05有统计学意义。 3结果 3．1动物一般情况的观察和体重的比较 ·352· 正常组大鼠生长良好，体重自然增长，行走正常，活动敏捷，食欲正常，毛发整齐，大便成形。 大鼠造模后，精神不振，尿黄，大便呈淡黄色，第2周开始出现腹部肿大，疑是腹水。给药后各组 大鼠体重开始缓慢增加，尿黄明显减轻，大便仍呈淡黄色，精神不振缓解。 3．2各组大鼠血清肝功能指标测定(见表1) 表1化肝通络方对胆汁淤积肝硬化模型动物肝功能的影响(珏s) 与模型组比，+P0．05，,It,ll,P0．001 3．3各组大鼠肝脏组织HE染色病理形态变化 各组大鼠肝脏组织HE染色病理显示：①假手术组中大鼠肝小叶结构存在，肝板排列整齐，个 别例结构稍紊乱，以中央静脉为中心向周围放射状排列，肝细胞多边形，浆丰富，核大而圆，少见 双核；②模型组中大鼠肝脏散在炎性细胞浸润，纤维结缔组织增生将肝小叶分割成假小叶结构；⑨ 阳性药组中大鼠肝脏无明显炎性细胞浸润，纤维结缔组织增生明显改善；④低剂量组中大鼠肝脏炎 性细胞浸润存在，纤维结缔组织轻度增生；⑤中剂量组中大鼠肝脏炎性细胞浸润减少，少许纤维结 缔组织增生；⑥高剂量组大鼠肝脏无明显炎性细胞浸润，纤维结缔组织增生明显改善。 3．4肝组织免疫组织化学染色法测定TGF．p1、Smad3、Smad7表达(见表2) 与模型组比，幸P0．05，¨P0．001 4讨论 原发性