毛细管电泳仪分离测定雪碧.docVIP

毛细管电泳仪分离测定雪碧、芬达中的苯甲酸 P谭晓丹 一、实验目的 （1）了解毛细管电泳仪（以安捷伦7100为例）的结构及基本操作。 （2）了解毛细管电泳分离的基本原理。 （3）掌握色谱的基本定性、外标法的定量方法。 二、实验原理 苯甲酸钠是苯甲酸的钠盐，无味或略带安息香气味，在空气中十分稳定，易溶于水，由于比苯甲酸更易溶于水，比苯甲酸更常用与工业生产。但有研究显示，苯甲酸类具有叠加毒性作用，普遍已改用山梨酸盐作为防腐剂。 电泳指带电粒子在电场作用下作定向运动的现象。电泳有自由电泳和区带电泳两类，区带电泳是将样品加于载体上，并加一个电场。在电场作用下，各种性质不同的组分以不同的速率向极性相反的两极迁移。利用样品与载体之间的作用力的不同，并与电泳过程结合起来，以期得到良好的分离。因此，电泳又称电色谱。本实验通过使用毛细管电泳法对饮料中苯甲酸钠含量进行定性定量测量，得出了饮料中苯甲酸钠的含量。 三、仪器与试剂 1. 仪器 Agilent 7100型液相色谱仪； 2. 试剂 1.0 mol/L氢氧化钠溶液；20 mmol/L PH=9.3硼酸钠溶液；雪碧滤液（脱气后经0.45μm滤膜过滤）；芬达滤液（脱气后经0.45μm滤膜过滤）。 四、实验步骤 1. 确定实验条件 打开计算机，等计算机启动完毕后，打开毛细管电泳仪电源开关。通讯完毕后，设定操作条件：分别在进样盘中放入相应的溶液：1、NaOH溶液；2、纯水；3、空；4、5、6、硼酸钠溶液；7、空；8、废液。 CE平衡步骤： 第一步，设定inlet为1号位置，outlet为8号位置冲洗300秒。 第二步，设定inlet为2号位置，outlet为8号位置冲洗300秒。 第三步，设定inlet为6号位置，outlet为8号位置冲洗300秒。 Method Parameter CE(Default Settings)： Vials Inlet home vial 4 Outlet home vial 5 Cassette Temperature 20.0 ℃ High Voltage System Enable high voltage Voltage 0.0V Current 300μA Power 6.0 W Low current limit OFF Stoptime 10.0 minutes Posttime OFF Replenishment Replenishment and preconditioning parallel processing No replenishment used CE Conditioning Flush inlet 6 Vial, outlet 8 Vial for 5 minutes CE Injection Inject by pressure,50 mbar,4 seconds Timetable Change voltage 0.2 minutes,30 kV 2. 样品制备 将雪碧、芬达倒入烧杯后放在超声波仪中超声脱气，去除饮料中溶解的空气以及大量二氧化碳气体。脱气后的雪碧、芬达溶液通过.45μm的滤膜过滤后，转移至进样瓶中备用。 称量0.2g的苯甲酸钠，用20 g/L的NaHCO?溶液加热溶解于10ml的容量瓶中，再从中移取2.5mL溶液至50ml容量管中定容作为母液。再分别从母液中移取4mL、6mL、8mL、10mL溶液至25mL容量瓶中定容。 3. 毛细管电泳仪样品测试参数 Method Parameter Replenishment Replenishment and preconditioning parallel processing No replenishment used CE Conditioning Flush inlet Home Vial, outlet Out Vial for 5 minutes CE Injection Inject by pressure,50 mbar,4 seconds Timetable Change voltage 0.2 minutes,30 kV 4.样品测定 （1）把苯甲酸钠标准液放置于进样盘12、13、14、15位置处测试，并获得保留时间及峰面积。 （2） 将未知浓度雪碧滤液、芬达滤液放置于进样盘17、18处测试，以获得此溶液中苯甲酸钠的保留时间及峰面积。 5. 关机 用纯水冲毛细管约半小时，观察基线平稳后，可在工作站上关闭电泳仪及检测器，然后关闭工作站，再依次关闭仪器电源及计算机电源。 五、 数据处理 由步骤3获得的各标准溶液的实验结果，绘制峰面积-浓度标准曲线，再根据步骤4测得的值. Tab1实验结果 Name Rt (min) ci (mg/m