圆二色光谱在蛋白质结构研究中应用.pdfVIP

氨基酸和生物资源 2010，32(4)：77～80 AminoAcids B f Resources 圆二色光谱在蛋 白质结构研究中的应用 吴 明和 (武汉大学生命科学院，武汉430072) 摘要：近几年来，圆二色光谱在蛋 白质结构研究中的应用越来越广泛。通过对远紫外圆二色光谱的测量 ，可以推导出稀 溶液中蛋白质的二级结构 ，进而分析和辨别蛋白质的三级结构类型；通过对近紫外圆二色光谱的测量和分析，可以推断蛋白 质分子中芳香氨基酸残基和二硫键的微环境变化，研究介质与蛋白质结构问的关系；通过测定实验参数和环境条件变化时的 圆二色光谱，可以研究蛋 白质构像变化过程中的热力学和动力学特性。 关键词：圆二色光谱 ；蛋 白质；二级结构；芳香氨基酸残基；二硫键 中图分类号：Q5 文献标识码 ：A 文章编号：1006—8376(2010)04—0077—40 1 蛋白质 圆二色产生的分子基础和特征 白质或多肽的二级结构；近紫外区的圆二色光谱反 1．1 蛋 白质圆二色产生的分子基础 映了芳香族氨基酸残基和二硫键在不对称环境 中的 由于光学活性分子对左、右圆偏振光的吸收不 圆二色性，主要揭示蛋白质的三级结构信息；研究不 同，使得左 、右圆偏振光透过后变成椭 圆偏振光 ，这 对称微环境的变化和影响，对肽键在远紫外区的CD信 种现 象就是 圆二 色性 (CircularDichroism，简称 号并不造成干扰，在研究中可以将这些信息作为光谱 CD)。蛋白质是具有特定结构的生物大分子，由氨 探针。紫外 一可见光谱主要用于辅基的偶合分析 ， 基酸通过肽键连接而成 ，它具有一级结构 、二级结 如图1是CD测定蛋白质二级结构的特征分布 。 构、三级结构、四级结构几个主要结构层次，有的还 有结构域或超二级结构 。在蛋 白质和多肽分子 中， 肽链骨架中的肽键 、芳香氨基酸残基及二硫桥键是 主要的光活性生色基 团，当平面圆偏振光通过时，这 些生色基团对左右 圆偏振光 的吸收不 同，造成偏振 光矢量的振幅差，使得圆偏振光变成了椭圆偏振光， 就产生了蛋 白质的圆二色性 ¨J。圆二色光谱是一 种差光谱，是样品在左右旋偏振光照射下的吸收光 谱差值 。 1．2 蛋白质圆二色特征 蛋 白质的CD光谱主要是活性生色基团及折叠 图 1 CD测定蛋 白质二级结构的特征分布 结构两方面圆二色性的总和。根据 电子跃迁能级能 (0) 一螺旋，(●)B一折叠，(△)B一转角及(▲)P2结构多肽的CD谱 量的大小，蛋 白质 的 CD光谱分 为三个波 长范 围 ．4；(1)250nm以下的远紫外光谱区，圆二色性 从 图上可以看到，特征峰谱带有明显的特点，如 主要肽键的n一叮T电子跃迁引起 (2)250～300nm 表 1所示。 的近紫外光谱区，主要 由侧链芳香基 团的 育一盯 电 子跃迁引起；(3)300～700nm的紫外 一可见光光谱 表 1 CD测定二级结构的特征峰分布 区，主要 由蛋 白质辅基等外在生色基 团引起 。远 紫外区的圆二色光谱反映了蛋 白质或多肽的规则二 级结构中肽键排列的方 向和能级跃迁情况，通过对 谱带位置和吸收强弱的分析对 比，就能研究不同蛋 收稿 日期：2010—09—27 作者简介 ：吴明和，男 (1964一)工程师 · 78 · 吴 明和： 圆二色光谱在蛋白质结构研究中的应用 2 蛋白质圆二色光谱测定的条件要求 2．3 缓冲液、溶剂要求与池子选择 2．1 样品要求 缓冲液和溶剂在配制溶液前要做单独的检查， 样品必须保持一定的纯度 不含光吸收的杂质； 看是否在测定波长范围内有吸收干扰，看是否形成 溶剂必须在测定波长没有吸收干扰 ；样品能完全溶 沉淀和胶状 ；在蛋白质测量 中，经常选择透明性极好