PCR技术与其在动物胚胎性别鉴定中的应用研究.pdfVIP

《江西畜牧兽医杂志》1999 年第 1 期 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　·专论与综述 · PCR 技术及其在动物胚胎性别鉴定中的应用研究 黄国清 　潘 　　珂 　　　　　　　　陈　颖 　　　 ( ) ( ) 江西农业大学动科院　南昌330045 　 江西民星企业集团 　　PCR ( Polymerarse Chain Reaction) 为聚合酶链 研究真核 DNA 外显子 。 式反应或体外扩增技术 ,是 1985 年美国 Cetus 公司 2 . 2 　复合 PCR (Multiplex PCR) 人类遗传部 、加利福尼亚大学洛杉矶和 Howghes 医 复合 PCR 技术就是在一个反应环境中 , 同时加 学院等联合创建的一项体外酶促扩增 DNA 新技 入多对不同的引物 , 从而获得最大效率的 PCR 产 术 ,具有特异性强 、敏感性高 、操作简便 、快速高效等 物 。也就是说 ,在 PCR 反应系统中 ,用多组引物同 特点 ,现已广泛用于生物医学 、传染病原 、遗传缺陷、 时放大多个基因。最新的复合 PCR 反应记录是由 畜禽疾病诊断、考古学等许多领域 。最近一些年来 , Chamberiain 创造的 ,采用 9 套不同的引物 ,从而得 国内外将 PCR 技术用于鉴别哺乳动物胚胎的性别 , 到 DMD 基因片段 。为了获得特异性高的 PCR 产 并取得了不少成果 。现将 PCR 技术发展及其在动 物 ,最好用 2 对套叠的引物 。 物胚胎性别鉴定上的应用作一概述 。 2 . 3 　倒转 PCR ( Inverted PCR) 1 　PCR 技术的基本原理 常规 PCR 是扩增 2 个引物之间的 DNA 片段 , PCR 技术原理类似于天然 DNA 的复制 ,主要 倒转 PCR 是用反链的互补引物来扩增 2 个引物以 是利用 DNA 聚合酶依赖于 DNA 的特性 ,模仿体内 外的 DNA 片段 。此技术主要用于分析 DNA 序列 的复制过程 ,在附加的一引物之间诱发聚合酶反应 。 未确定的情况 。 PCR 全过程包括 DNA 模板变性 、退火 、延伸 3 个步 2 . 4 　连接子 PCR 骤的若干次循环 。首先是双链态的靶 DNA 在高温 在引物的 5′端引入一个含有限制性酶切位点 ( ) 作用下变性解链 ,产生单链 DNA ; 然后降低温度使 的寡核苷酸序列 原模板中没有的 ,经 PCR 后扩增 人工合成的 2 个寡核苷酸引物分别与各 自的互补 产物的 5′端就带上了这段序列 。一些连接子可 以 ( ) DNA 杂交 退火 而定靶 DNA 的特定区域 ;在 Taq 与 DNA 片段的末端连接 ,利用它可以进一步将片 DNA 聚合酶的作用下 ,在 4 种 dDNA 底物存在时 , 段克隆到载体分子上 。 引物链将沿着 5′～3 ′方向延伸与模板互补形成新 2 5 　标记 PCR ( ) 链 。新合成的引物延伸链经高温变性后又可作为模 PCR 扩增时是利用 4 种单核苷酸 dN TP ,若 板参与下一轮循环 ,结果使靶 DNA 分子量呈指数 底物中的单核苷酸用放射性同位素 、生物素 、地高辛 增多 。