人胚胎干细胞无饲养层培养体系第研究进展.pdfVIP

西部医学 2009年 6月 第 21卷第6期 MedJWestChina，June2009，Vo： ! ： 人胚胎干细胞无饲养层培养体系的研究进展 孙常松，周轶平 综述 李玛琳 审校 (昆明医学院云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明650031) 【摘要】 人胚胎干细胞具有重要的基础研究价值和巨大的临床应用前景。建立一个理想的人胚胎干细胞培养体系 是利用它的前提，但传统的饲养层培养体系中的动物源性物质和大量的未知成分影响了研究人员对人胚胎干细胞培养 体系的研究，所 以建立一个人胚胎干细胞无饲养层培养体系是非常有必要的。本文主要从细胞外基质、条件培养基、无 血清培养基和成分确定的培养基等方面对人胚胎干细胞无饲养层培养体系的研究进展进行综述。 【关键词】 人胚胎干细胞； 无饲养层培养体系； 限定性培养基 【中图分类号】 Q813 【文献标识码】 A 【文章编号】 1672—3511(2009)06—1029—03 人胚胎干细胞(humanembryonicstemcell，hESC)是 由受 作为饲养层，成功维持 3株 hES细胞系生长 50代，其体外增殖 精 4—5天的囊胚 内细胞团(innercellmass，ICM)分离出来 的具 活性等 同于培养在 MEF上 的hES细胞 。但是这种 由 Miz— 有发育多能性、在体外可无限增殖的细胞系 。Thomson等[1]首 hES6细胞系 自发分化得来的成纤维细胞样细胞数量有限，因 次成功建立了5株 hES细胞系，并在体外培养成功，hES细胞 此限制 了这种培养 的大规模应用。近来 ，有研究小组用从人 的 的培养体系就一直在不断地发展进步。传统的饲养层培养体 胎盘获得的间充质干细胞 (humanplacenta—derivedmesenchy— 系制备繁琐 ，因此以无饲养层培养体系替代饲养层培养体系， malstemcel1)作为饲养层细胞 ，成功维持了SUNhES3生长超 是近年来 hES细胞基础研究的重点和热点。本文就 hES细胞 过 5O周，并保持 了hES细胞 的正常生物学性状 。与其它人源 元饲养层培养体系的研究进展做一综述。 性饲养层相比，这种饲养层更接近于人体 内环境 ，使 hES细胞 1 饲养层培养体系及其特点 饲养层培养条件 的研究前进了一大步[5]。然而 ，并不是所有人 1．1 hES细胞 的饲养层是指经过处理的，与 hES细胞共培养 源性饲养层细胞都能很好 的支持 hES细胞 的生长 ，而且用异 时能促进其增殖并抑制其分化 的细胞 。饲养层 的主要特点是 体来源 的细胞仍存在交叉污染危险。 能提供支持 hES细胞生长的细胞外基质及产生促进 hES细胞 2 无饲养层培养体系及其特点 增殖并抑制其分化的多种因子 ，维持 hES细胞 的无限增殖且 无饲养层培养体系的最大特点是能够减少或者消除饲养 保持其核型正常。 层细胞所带来的干扰，从而能够更好地研究 hES细胞的生长 1．2 用丝裂酶素 C或是放射线处理过 的小 鼠胚胎成纤维细胞 条件。无饲养层培养体系的组成要素有：①细胞外基质 (extra- (mouseembryonicfibroblasts，MEF)是最早使用 的饲养层。 cellularmatrix，ECM)。②条件培养基(conditionmedium，CM) 由于 MEF可能携带动物源性病原体 ，会使与其共培养 的hES 或限定性培养基 (definedmedium，DM)。 细胞表面检测到一种人所不具有 的唾液酸分子 Neu5Gc，具有 2．1 细胞外基质 细胞外基质具有连接和支持细胞 、组织的 免疫原性，因而限制 了将 hES细胞用于临床疾病治疗 的可能 作用，各种细胞外基质的状态、密度、性质等会对 hES细胞的生 性。为了弥补 MEF的这一缺点，很多研究小组尝试用各种人 长状态产生很大的影响。Kleinman