免疫筛选日本血吸虫cDNA文库的研究进展.pdfVIP

维普资讯 地方病通报 2008年第23卷第3期 EndemicDiseasesBulletin2008Vo1．23，No．3 ·73· 文章编号：1000．3711(2008)03-0073-03 免疫筛选 日本血吸虫 eDNA文库的研究进展 柳建发 ，汤治元，刘玉新，杨淑娟 (浙江宁波大学医学院，浙江 宁波315211) 关键词：免疫筛选；日本血吸虫；eDNA文库；综述 中图分类号：R383．24；Q342．2；R—l 文献标识码：A 日本血吸虫病是一种流行广泛并严重危害公众健康的人 与日本血吸虫辅酶 Qlo氧化还原酶(SjCHGC)基因具有高度的 兽共患寄生虫病。目前研制开发高效的抗血吸虫疫苗和新型 同源性。汪世平等制备致弱尾蚴免疫兔血清作为探针筛选 日 药物已成为血防科研的热点领域。采用定 向克 隆工具构建优 本血吸虫尾蚴eDNA文库 ，挑取阳性克隆，测序并进行生物信息 质的基因表达文库，筛选保护性抗原，对于从分子水平上深入 学分析”』。结果共筛出8个阳性克隆，长度分布于 0．6—3．0 研究日本血吸虫的发病、免疫，寻找疫苗候选分子具有重要的 lb【。随机选取4个阳性克隆进行 PCR扩增及测序，获得2个 日 现实意义。此外 ，文库的滴度、重组率及插入片段的大小是鉴 本血吸虫新基因：整合酶相似蛋白编码基因和蛋白磷酸酶 1催 定eDNA文库质量的重要指标 ．2J。本文对此作一综述。 化亚单位编码基因。前者长度为636bp，含一个462bp完整开 放阅读框 (ORF)；后者 l879bp，含一个984bp完整ORF。实 1 筛选 日本血吸虫虫卵eDNA文库 验证明，致弱尾蚴免疫兔血清可作为筛选 日本血吸虫新基因的 吴海玮等应用定向克隆方法，将 日本血吸虫虫卵cDNA片 有效探针，为防治血吸虫病提供候选疫苗和治疗药物靶点。曾 段重组入噬菌体载体hgtllSfi—Not的EcoRI和NotI双酶切 少华等制备天然分子免疫猪血清，将筛选的尾蚴eDNA文库中 位点之间 。所构建的基因表达文库的容量为l，07×10 重 大肠杆菌XLI—Blue侵入大肠杆菌 BM25．8后环化成质粒，筛 组子。经含有 IPTG及X—Gal的颜色选择平皿测定，初步提示 选出已转入质粒的菌株 J。提取质粒 DNA，进行测序，得到一 重组效率达 100％，为抗病疫苗尤其是抗卵抗原的筛选奠定了 个表达序列标签。结果 ，从26个克隆样品中筛选出8个阳性克 基础 。何卓等为了获得抗雌虫生殖和卵胚发育相关抗原的血 隆，其中有一个新基因，该基因全长 861bp，有完整的阅读框 吸虫基因，通过采用抗 日本血吸虫未成熟卵 SIEA26—28kDa 架，与蜜蜂(Apismellifera)SMC3蛋白编码的mRNA基因序列同 免疫血清对 日本血吸虫eDNA文库进行筛选 j。共获得 阳性 源性最高。 克隆23个，经重复筛选之后，随机挑取其中的5个阳性克隆，分 别进行 PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳显示，获得单一扩增条带，其 3 筛选 日本血吸虫童虫eDNA文库 大小位于 150bp—1．5kb，成功地从 日本血吸虫 eDNA文库中 童畅等根据GeneBank中的 日本血吸虫TPM基因开放阅读 筛选出抗卵相关阳性克隆。 框设计合成一对引物 ，应用 PCR测定 eDNA文库中基因的频 率 』。根据测得的频率 ，将适量的噬菌体接种于96孔细胞培 2 筛选 日本血吸虫尾蚴DeNA文库 养板上进行细菌培养扩增 ，再利用 PCR鉴定阳