中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞衰老和机制研究.pdfVIP

上 海交 通 大 学 学 报 (医 学 版 ) Vo!．30No．7Ju1．2010 JournalofShanghaiJiaotongUniversity(MedicalScience) 文章编号：1674—8115(2010)07—0807—05 ·论 著 · 中波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞衰老及机制研究 胡孝辉， 高丰厚， 方 勇 (上海交通大学 医学院第三人民医院烧伤整形科 ，上海 201900) 摘 要 ： 目的 探讨中波紫外线 (UVB)对人皮肤成纤维细胞 的诱导衰老作用及可能机制。方法 使用组织块法分离培养原代人 皮肤成纤维细胞 ，通过观察不 同剂量 UVB照射后 的细胞形态学改变以及 p一半乳糖苷酶 (p—ga1)细胞衰老染色情况 ，确定后续实 验诱导皮肤成纤维细胞衰老的UVB单次照射剂量 。于经确定剂量 UVB照射后的不同时点(12、24、48、72h)收集细胞及其细胞 培养上清液 ，Westernblotting检测诱导衰老的皮肤成纤维细胞衰老相关蛋白P16表达 ；ELISA法检测诱导衰老细胞 I、Ⅲ型胶原 及基质金属蛋 白酶 l、3(MMP1、MMP3)表达 。结果 经40mJ／cm UVB单次照射 的人皮肤成纤维细胞呈现典型的衰老细胞形态 学改变，B—gaJ细胞衰老染色阳性细胞百分 比为 (88．75±5．32)％，确定诱导衰老 UVB单次照射剂量为 40mJ／cm 。Western blotting显示 ，诱导衰老皮肤成纤维细胞 P16蛋 白表达随UVB照射时间的延长而明显升高；ELISA法检测发现诱导衰老细胞 I、 Ⅲ型胶原表达随 UVB照射时间的延长而明显减少 ，MMP1和 MMP3表达则随 UVB照射时间的延长而显著增加。结论 UVB照 射能诱导人皮肤成纤维细胞发生衰老，其机制可能与细胞胶原合成减少而降解增加有关 。 关键词 ：人皮肤成纤维细胞；衰老；胶原；基质金属蛋 白酶 ；中波紫外线 中图分类号 ：Q255；Q266；R751 文献标 志码 ：A Senescenceofhuman skin fibroblastsinducedbyultravioletB anditsmechanism HU Xiao—hui，GAO Feng—hou，FANG Yong rDepartmentofBurnsPlasticSurgery，TheThirdPeoplesHospital，SchoolofMedicine，ShanghaiJiaotongUniversity， Shanghai201900，China) Abstract：Objective ToinvestigatetheroleofultravioletB (UVB)ininductionofsenescenceofhumanskinfibroblasts andexplore itsmechanism． Methods Primary human skin fibroblastswere isolated and culturedbytissueexplants adherentmethod，andUVB irradiation doseforinduction ofsenescenceofskin fibroblastsofrsubsequentexperimentwas determinedthroughobservationofcellmorphologyandp—galactosidase(p—ga1)cellsenescencestainingafterirradiationwith differentdosesofUVB．Cellsandsupernatantofcellculturewerecollectedatdifferenttimepoints(12，24，48and72h) afterirradiationwith established dosesofUVB． The expression ofmarkerP16 protein in induced senescentcellswas detectedbyWesternblotting，andexpressionoftypeIcollagen，typeIIIcollagen，matrixmetaUoproteinase(MMP)一1and