高效复合菌对氯代苯酚类化合物的微生物修复研究.pdfVIP

高效复合菌对氯代苯酚类化合物的微生物修复研究 崔静 河海大学环境科学与工程学院，南京 (210098) E-mail ：happyhell8888@ 摘 要：通过从江苏省扬子石化公司污水处理厂曝气池出口处取活性污泥样品，驯化、培养、 分离得到氯代酚类芳烃化合物的复合菌作为微生物源，采用细菌生长抑制法分别进行了 2- 氯苯酚、3-氯苯酚和4-氯苯酚的24h 急性毒性试验，求得了相应的24h 半数抑制浓度值及 24h 毒性效应-关系曲线。结果表明，所获得的复合菌群较自然水体中混合细菌对氯代苯酚 有更强的耐受性。采用实验室摇瓶法测定了这三种受试化合物的生物降解曲线，对应的降解 速率常数 K 分别为：2- 氯酚为 K= 0.0112 (h-1) 、3- 氯酚为 K=0.0556(h-1) 、4- 氯酚为 K=0.0038(h-1) ；降解半衰期t1/2 分别为61.9 (h)、12.5(h)和182.4(h)。 关键词：氯代苯酚类化合物，复合菌，生物降解，急性毒性 自20 世纪 30 年代以来，氯酚类化合物（CPs ）广泛用于木材防腐剂、防锈剂、杀菌剂 和除草剂等，在亚洲、非洲和南美洲还用于血吸虫病的防治，许多工业化国家 CPs 的生产 规模非常庞大。其中，2-氯酚、2,4-二氯酚、2,4,6-三氯酚和五氯酚都是毒性很高的物质，被 美国 EPA 列入优先控制污染物的黑名单。氯酚类化合物的大量使用，使得大量的 CPs 污染 物进入了环境，导致水中该类有机物浓度的增高，对人体健康和自然生态系统造成严重的影 响[1] 。实践证明，它们很容易穿透常规水污染控制工程屏障，进入自然环境并长期存留和富 集，产生一系列环境问题。目前，国内外已就氯酚类有机物对微生物的驯化影响、第二基质 存在时的诱导、对同类有机物的共代谢等生物降解性能进行了大量的研究[ 2~3] 。可以说，清 除环境中的该类化合物是人类面临的一大挑战。为恢复受污环境的功能，许多国家在八十年 代中期至九十年代初，先后制订了修复计划。 众所周知，生物修复技术是在生物降解的基础上发展起来的一种新兴的清洁技术，是传 统的生物处理方法的发展。对于如何较好地判断生物修复是否成功，目前普遍的看法就是要 证明污染地污染物的消除是微生物降解代谢的结果[1] 。而近年来，较为成功地达到工程实用 化程度的便是水体生物—生态修复技术[2]，因此，想要较好地运用生物修复技术，首先就不 得不在生物修复效果监测和过程控制方面寻求到一个强有力的手段。作为水毒理学的一个重 要组成部分—水生生物毒性试验，就是这样一个评价化学物质对水生生物影响和水体污染的 重要手段。本文通过构建三种氯代酚类化合物的剂量—反应关系曲线来表征受试生物对毒物 的反应（毒物的毒性），采用高效菌株技术来发挥微生物对外源性化合物的巨大降解和修复 潜能，为规范和限制氯酚类化合物的生产、使用和排放，制定其在水环境中的允许浓度和排 放标准提供理论依据。 1 材料与方法 1. 1 样品采集 样品取自江苏省扬子石化公司污水处理厂曝气池出口处，污泥含量 5-10g/L； 采集完成 后，将污泥放置于 4 ℃冰箱中冷藏，使污泥中的细菌处于休眠状态。 - 1 - 1. 2 目标化合物及主要仪器 2-氯酚(中国亨新化工制剂厂) ，3-氯酚(英国 Lancaster 牌) ，4-氯酚(上海飞样化工厂) ，均 为分析纯； UV-1201 型紫外可见分光光度计；SW-CJ-2 型医用无菌操作台；YX-450Z 型热力蒸汽压 力消毒器；Waters Corporation 液相色谱仪（HPLC ）；SHA-BA 型恒温震荡器；Anke TGL-16G-A 高速离心机；生化培养箱 1. 3 培养基及缓冲溶液的配比 (1) 固体培养基：牛肉膏3g，蛋白胨 10g，NaCl5g ，琼脂 15g，蒸馏水 1000ml，pH 7.2～ 7.5 (2) 液体