大鼠去甲肾上腺素（NA）ELISA试剂盒.doc

大鼠去甲肾上腺素(NA)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理 本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 NA(Norepinephrine, Noradrenaline) 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 NA与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠NA，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，NA浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中NA浓度。 试剂盒组成（2-8℃保存） 板96孔 10×标本稀释液（Sample Buffer） 12ml 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） 50ml 标准品： 2瓶 第一抗体工作液（Biotinylated Antibody） 12ml 终止液 准备试剂与收集血样 收集标本：血清、血浆（EDTA、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃混匀，配成0ng/ml的溶液设标准8管，第一管加标本稀释液900ul，第二至第八管加入标本稀释液500ul。在第一管中加入0ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul，移至第二。如此反复作对倍稀释，从第七中吸出500ul弃去。第八为空白对照。标本稀释液用蒸馏水作1:0倍稀释（1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水） 检测程序 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。 洗板：同前。 每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。 洗板：同前。 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。 每孔加入100ul终止液混匀。 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。 结果计算与判断 所有OD值都应减除空白值后再行计算。 以标准品256、128、64、32、16、8、4、0 ng/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。 根据样品OD值在该曲线图上查出相应NA含量即可。 试剂盒性能 1. 灵敏度：最小的NA 检测浓度小于g/ml。 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠NA。不与 1. 以上标准孔及待样品均建议做复孔，每次测定应同时标准曲线。 2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。 3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。 4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。 5. 上海西唐生物科技有限公司 电话:021 :westang@163.com