骨髓间充质干细胞抑制异基因小鼠巨噬细胞活化.pdfVIP

骨髓间充质干细胞抑制异基因小鼠巨噬细胞的活化1 杨义武，白海，王存邦，林梅，武令启 兰州军区兰州总医院血液科，甘肃兰州 (730050) E-mail: baihai98@ 摘 要：目的 探讨 SD 大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对脂多糖(LPS)刺激后BALB/c 小鼠 腹腔巨噬细胞活化的影响。方法 采用贴壁筛选法分离、纯化SD 大鼠骨髓MSCs ，用巯基 乙酸钠腹腔注射刺激的方法收集小鼠腹腔巨噬细胞，依材料和方法所述分组，建立共培养体 系。在LPS （终浓度1ug/ml ）刺激巨噬细胞18 小时后收集细胞培养上清，检测TNF-α 和 NO 等细胞因子分泌量的变化。结果 巨噬细胞活化后培养上清中TNF-α和NO 的含量明显 上升，分别为(147.41±37.13)pg/ml ，(59.93±8.74)uM；而MSCs 存在时，TNF-α 和NO 的含 量显著减少（38.24±28.83 ）pg/ml 、（38.71±6.11 ）uM ，P ＜0.0005 。结论 实验首次发现， SD 大鼠MSCs 可抑制LPS 刺激后小鼠腹腔巨噬细胞的活化。 关键词：骨髓间充质干细胞；巨噬细胞；活化；脂多糖 MSCs 是比较原始的骨髓基质细胞，具有基质细胞的特性，与基质细胞、巨噬细胞和内 皮细胞等一起构成造血微环境，支持造血。MSCs 不表达MHC Ⅱ类分子和FasL ，不表达共 刺激分子 B7-1 ，B7-2 ，也不表达或低水平表达MHC Ⅰ类分子、CD40 和 CD40L[1]，表明 MSCs 具有低免疫原性。已有的证据表明，MSCs 对机体免疫系统的调节作用是相当广泛的， 其作用的细胞不仅包括特异性免疫反应细胞,如T 淋巴细胞和B 淋巴细胞，也作用于非特异 [2-5] 性免疫反应细胞如树突状细胞（dendritic cell DC ）和自然杀伤细胞（natural kill cell ）等 。 但MSCs 对巨噬细胞的影响尚未见报道，为了解MSCs 对LPS 诱导的异基因小鼠巨噬细胞 活化的影响，进行了体外条件下SD 大鼠MSCs 对LPS 诱导后BALB/c 小鼠腹腔巨噬细胞活 化的影响的实验研究。 1. 材料和方法 1.1 实验动物 SD 大鼠和BALB/c 小鼠由兰州军区总医院动物实验中心提供，饲养环境条件为清洁级。 1.2 材料 巯基乙酸钠、α-乙酸萘酯和LPS 购自Sigma 公司，RPMI1640 、DMEM 培养基购自Gibco 公司，胎牛血清购自杭州四季青公司，TNF-α ELISA 检测试剂盒购自奥地利Bender 公司， NO 检测试剂盒购自美国BioVision 公司。 1.3 SD 大鼠骨髓间充质干细胞的分离纯化 取正常SD 大鼠（雌性，体重300g 左右），无菌操作分离股骨、胫骨，用DMEM 培养 液冲出骨髓。种植在含热灭活低毒的 10%胎牛血清、青霉素 100u/ml、链霉素 100mg/ml 的 DMEM 培养液中，于37℃，5%CO ，饱和湿度条件下培养48 小时，换液，去除悬浮细胞， 2 此后每周两次换液，至细胞覆盖瓶底约80%时消化传代。采用第三代细胞进行实验。 1.4 小鼠腹腔巨噬细胞的分离 取正常BALB/c 小鼠（雄性，体重20g 左右），给小鼠腹腔注射1ml 4%经消毒的巯基乙 1 本课题得到全军“十一五”杰出人才基金资助项目（06J005 ）的资助。 - 1 - 酸钠溶液，4 天后用冰冷的RPMI1640 培养液冲洗腹腔。用巯基乙酸钠溶液腹腔注射刺激后 收集的巨噬细胞（每个实验中从3-5 只小鼠收集的细胞群体）是吸出的腹腔灌洗液细胞中黏 6 附于塑料组织培养板的细胞