高糖诱导人脐静脉内皮细胞衰老过程中活性氧与一氧化氮合酶／一氧化氮系统的变化.pdfVIP

中国中西医结合急救杂志2009年9月第 16卷第5期 ChinJTCMwMCritCare，September2009，Vol鱼’No．5 ·275 · · 论 著 · 高糖诱导人脐静脉内皮细胞衰老过程中活性氧 和一氧化氮合酶 ／一氧化氮系统的变化 伊桐凝n一，张 锦n，单海燕 (1．中国医科大学附属第一医院⑤内分泌科 ，⑥干诊科，辽宁 沈阳 110001； 2．辽宁中医药大学附属医院内分泌科) 【摘要】 目的 观察高糖加速 内皮细胞衰老过程中细胞 内活性氧 (R0S)水平和一氧化氮合酶 ／一氧化氮 (N0s／N0)系统的变化。方法 将正常浓度糖 (5．5mmol／L)和高浓度糖 (分别为 l1、22、33mmol／L)培养液作 用于人脐静脉 内皮细胞 48h后，用 半乳糖苷酶 (ga1)染色鉴定衰老细胞，用聚合酶链反应一酶联免疫吸附法 (PCR—ELISA)检测端粒酶活性，用硝酸盐还原酶法检测细胞上清液 总NO水平 ，用蛋 白质免疫 印迹法 (Westernblotting)分析 内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)蛋 白表达，用荧光酶标仪检测细胞 内NOS活性，用流式 细胞仪检测细胞内ROS水平。结果 高糖培养液作用于内皮细胞 48h后，与对照组比较 ，随糖浓度升高内皮 细胞 gal染色阳性细胞数明显增多 ，端粒酶活性下降，细胞NO合成减少，NOS活性被抑制，细胞 内ROS水 平明显升高 (PO．05或PO．01)，但 eNOS蛋 白表达变化不明显 。结论 高糖加速 内皮细胞衰老进程，其作 用机制可能与增强氧化应激 ，抑制 N0S／N0系统有关 。 【关键词】 高糖；衰老；端粒酶；一氧化氮合酶；一氧化氮；活性氧 中图分类号：Q255；Q343．3 文献标识码 ：A DOI：10．3969／j．issn．1008—9691．2009．05．008 Alterationsofreactiveoxygenspecieandnitricoxidesynthase／nitrogenmonoxidum system intheprocessesof endothelialcellsenescenceofhumanumbilicalvein inducedbyhighglucose YITong—ning ，ZHANGJin， SHAN Hai—yan． DepartmentofEndocrinologyandMetabolism，theFirstAffiliatedHospitalofChina M edicalUniversity，Shenyang 110001，Liaoning，China Correspondingauthor：ZHANGJin，Email：jinzhangcmu@yahoo．tom．cn [Abstract] Objective Toinvestigatethechangesofreactiveoxygenspecie (ROS)andnitricoxide synthase／nitrogenmonoxidum (NOS／NO)system acceleratedintheprocessesofendothelialcellsenescence afterexposureto high glucose．Methods Thehuman umbilicalvein endothelialcells (HUVECs)were culturedwithdifferentconcentrationsofglucoseat5．5mmol／Lnormallevelandhighlevels11，22and 33mmol／Lfor48hours，respectively．Afterwards，SA一13-galactosidase(gad stainingwasusedtoevaluatethe