诱导性多能干细胞若干关键问题的研究进展.pdfVIP

重庆医学2010年9月第39卷第18期 2521 ·综 述· 诱导性多能干细胞若干关键问题的研究进展。 李家速1，赵宜香3综述，姚忠祥2△审校 1．第三军医大学学员旅四队，重庆400038；2．第三军医大学组织胚胎学教研室，重庆400038； 3．中国药科大学中药学院09453班，江苏南京211198 关键词：诱导性多能干细胞；诱导；安全性；效率 doi：10．3969／j．issn．1671-8348．2010．18．064 中图分类号：R392．4；R457．7 文献标识码：A 文章编号：1671—8348 2010 18-2521—03 2006年，Takahashi和Yamanaka[1]研究小组利用逆转录胞的多潜能性[8]。但是由于所需外源因子个数不确定和重编 tran- 病毒将Oct3／4、Sox2、c-myc和Klf4四个转录因子 four程目标细胞的异质性等原因，重编程潜在的分子机制还是不完 scriptionfactors，4TFs 导入小鼠已分化的成纤维母细胞，再应全明了。 stem 用小鼠胚胎干细胞 embryoniccell，ESc 培养条件将其去2低毒性或无毒性载体的使用 stem 分化，重编程为诱导性多能干细胞 inducedpluripotent 最早得到的iPS是经由原癌基因e-myc或其蛋白产物生 cell，iPS 。iPS在形态结构、表面标志物、增殖分化和畸胎瘤形成的，Klf4也牵涉致癌作用。而且是通过逆转录病毒、腺病毒 成等方面与ESc极为相似，因此，其在移植免疫排斥、干细胞 及慢病毒来介导的，易导致外来因子异位表达整合人宿主细胞 治疗、组织器官再生以及法律伦理学等方面极具优势。自此以 的基因组，存在变异、自身基冈表达调节失调、移植后肿瘤形成 后，iPS便成为多领域的研究热点，在诱导的因子、载体安全 等风险，从『^i阻碍其未来的临床应用。最近的研究利用DNA 性、效率等方面都取得了举世瞩目的成果。本文将对iPS诱导 转座子、质粒及游离载体等。诱导成功后剔除外源性插入物，在 重编程的最新研究进展进行综述。 iPS安全性方面取得了突破性进展。 1诱导产生iPS的必要因子 Takahashi和Yamanaka[11研究小组证实了4TFs的组合作为多蛋白表达载体，在CAG增强子的驱动下，将串联在2A 可以诱导iPS的产生，但诱导的效率较低，安全性方面也存在 寡肽序列上的4TFs同时导入鼠和人多能性标记物高表达的 风险，因此这砦转录因子是否具有町替代性，是否均为必要因 成纤维细胞，成功获得iPS后又利用Cre重组酶瞬时转染系 子等问题还有待深入研究。 统。将外源性蘑组因子尤其是c-myc切除．降低了致癌风险，极 Yu等[z]利用慢病毒载体介导Oct4、Sox2、Nanog和Lin28大地增强了iPS在再生医学、药物筛选和构建疾病模型等方面 4种转录因子，成功诱导胎儿成纤维细胞转化为具有人ESe特 的臆用性。此方法的优点在于载体拥有自我剪切的能力，可以 征的iPS；Zhou等¨1则利用腺病毒介导Ngn3、Pdxl、Mafa3种 在移植后被剔除，但此途径莺组效率偏低。还有待进一步研究。 、转录因子转染成年动物的胰腺外分泌细胞，成功转化为胰岛B 因子去除，尽管保持了iPS的可塑状态，但依旧不能避免残余 细胞；而Huangfu等[4]只用Oct4、Sox2就生成了人成纤维细 胞的iPS，说明Oct4、Sox2在诱导莺编程的过程中是必需的。 插入物导致的基因突变。Woltjen等Ll¨采用相似的不依赖病 Kim等[5‘63利用单个转录因子Oct4的异位表达，即人为操纵外毒的单一化转座子piggyBac表达载体，介导可诱导的特殊转 源基因Oct4的导人和表达，成功诱导人胎儿神经干细胞转化 为iPS。证实Oct4在分子水平诱导多潜能性方面不仅是必要 座酶的瞬时表达，无痕迹地去除iPS的外源性插入物即致癌基 的而且是能够胜任的，实现了单冈子诱导iPS的创举。Oct4 是多能干细胞的标记物，被认为是只在多能干细胞中高水平表 因，从而使生成的iPS更安全和高效。 达的转录因子，通过外源性信号分子介导的信号转导通路，与 由此可见，2A寡肽序列的应用不仅使得诱导所需的转录 内源性转录因子Nanog、So】【2等共同组成基因调控网络，以维因子在单一结构上递送，而且使得外来结构的完全切除变得更 持干细胞的多能性。因其作用的多样性和表达的特异性而被认 加容易。这项新技术在加速重编程机制的深入研究和未来的 为是控制干细胞多能性的决定性因素【7】。通过逆转录病毒将 细胞治疗方面有重大意义。倘若与microRNA、基因标记等技 Oct4导入胎儿神经干细胞，嵌入鼠内细胞群，并在人ESc条件术结合起来，安全效果可能会更好。