甲基化特异性PCR联合结合重亚硫酸盐限制性内切酶法在胃癌抑癌基因甲基化检测中应.pdfVIP

中国临床保健杂志　20 10年 4月第 13 卷第 2期　, 20 10, .13, .2 ·113 · ·论著 · 基化特异性联合结合重亚硫酸盐 限制性内切酶法在胃癌抑癌基因 基化 检测中的应用 1 1 1 2 1 1 胡世莲 , 程昭栋 , 孙玉蓓 , 徐维平 , 沈干 , 孔祥勇 (1.安徽医科大学附属省立医院、安徽省立医院, 老年医学科, 肿瘤内科, 合肥 23000 1;2.安徽省循证医学中心) [摘要]　目的　探讨 基化特异性 ()方法检测胃癌组织中抑癌基因 基化的准确性, 联合应 用 方法与结合重亚硫酸盐限制性内切酶法()检测抑癌基因 基化状态的意义。方法　采用 检测胃癌组织抑癌基因3 启动子区 基化的状态, 随后再采用 检测胃癌组织标本的 基化 状态。分析两种方法检测结果的关系。结果　经方法检测 54 例肿瘤组织中共有 30 例标本发生3 基因启动子区异常 基化, 基化阳性率为 55.6%。经 方法检测 54 例肿瘤组织中有 27 例出现酶切 条带即存在 基化, 基化阳性率为 50.0%。经 方法检测, 在 方法检测的 30 例阳性标本中有 3 例未出现酶切条带即为假阳性。在 方法检测 3基因 基化阴性的 24 例标本中, 经 方法检 测, 3基因 基化阴性的标本亦为 24 例。 两种检测方法检测结果的阳性率差异无统计学意义 ( 0.05 )。结论　 基化特异性 方法在检测胃癌抑癌基因 基化状态的研究中具有较高的灵敏度, 方法可以检测出 方法中的假阳性标本, 联合应用两种方法检测胃癌组织中抑癌基因的 基化状态会使 实验结果更可靠、准确。 [关键词]　胃肿瘤; 基化;聚合酶链反应;基因, 肿瘤抑制;限制性内切酶图谱法 [中图分类号] 735.2　　　[文献标识码] 　　　[文章编号] 167 2-6790 (2010 )02-0 113-04 - 1 1 1 2 1 1 　-, -, -, -, , - (1., ., ., 23000 1, .2. -) [ ]　　- ().- .　, - 3,3 .,.　 3 30 54 (55.6%)., 50.0%(27 /54 ), .3 -24 - . - (0.05 ).　, .. . []　;;;, ;- 基金项目:国家自然科学基金资助项目(3067 2383) 作者简介:胡世莲, 主任医师, 教授, 博士生导师, -:@126. ·114 · 中国临床保健杂志　20 10年 4月第 13 卷第 2期　, 20 10, .13, .2 　　胃癌是最常见的恶性肿瘤之一, 其发生发展与 未修饰的正常人外周血 , 用水代替模板作为空 多种抑癌基因的失活有关。研究发现, 胃癌中许多 白对照。完成之后取产物 10 μ混合于 6 × 抑癌基因的失活是由于基因启动子区的异常 基化 加入浓度为 1.5%琼脂糖凝胶上电泳, [1] 引起的。研究表明 3基因启动子区域的异常 染色。运用图像采集与分析系统,记录并分析电 基化是导致该基因在胃癌细胞中失活的原因之 泳结果。 基化特异性引物扩增的条带则标本计为 一,在 50% ～64%的胃癌组织和胃癌细胞系中,存 基化(),非 基化特异性引物扩增条带则标本 [2-4] 在3基因启动子区域的异常 基化 。近年 计为非 基化 ()。 来, 已研究出多种检测抑癌基因 基化状态的方法, 1.2.4　结合重亚硫酸盐的限制性内切酶法 (- [5] )　经亚硫酸氢盐修饰和纯化的标本进行 - 法是 等 在亚硫酸氢钠转化的基础上