甲基化特异性PCR联合结合重亚硫酸盐限制性内切酶法在胃癌抑癌基因甲基化检测中应用.pdfVIP

中国临床保健杂志 2010年4月第 l3卷第 2期 ChinJClinHealthc，April2010，Vo 13．NO．2 · 论 著 · 甲基化特异性 PCR联合结合重亚硫酸盐 限制性 内切酶法在 胃癌抑癌基因甲基化 检测中的应用 胡世莲h，程昭栋h，孙玉蓓 ，徐维平 ，沈干h，孔祥勇 (1．安徽医科大学附属省立医院、安徽省立医院，a老年医学科，b肿瘤 内科，合肥 230001；2．安徽省循证医学中心) [摘要] 目的 探讨甲基化特异性PCR(MSP)方法检测 胃癌组织中抑癌基因甲基化的准确性，联合应 用MSP方法与结合重亚硫酸盐限制性 内切酶法 (COBRA)检测抑癌基 因甲基化状态的意义。方法 采用 MSP检测 胃癌组织抑癌基因Runx3启动子区甲基化的状态，随后再采用COBRA检测 胃癌组织标本 的甲基化 状态。分析两种方法检测结果的关系。结果 经MSP方法检测54例肿瘤组织中共有3O例标本发生Runx3 基因启动子区异常甲基化，甲基化阳性率为 55．6％。经COBRA方法检测54例肿瘤组织中有 27例出现酶切 条带即存在 甲基化，甲基化阳性率为 50．0％。经COBRA方法检测，在MSP方法检测的30例 阳性标本 中有 3 例未出现酶切条带即为假阳性。在MSP方法检测Runx3基因甲基化阴性的24例标本中，经 COBRA方法检 测，Runx3基因甲基化阴性的标本亦为24例。两种检测方法检测结果的阳性率差异无统计学意义 (P 0．05)。结论 甲基化特异性PCR方法在检测 胃癌抑癌基因甲基化状态的研究中具有较高的灵敏度 ，COBRA 方法可以检测出MSP方法中的假阳性标本，联合应用两种方法检测 胃癌组织中抑癌基因的甲基化状态会使 实验结果更可靠 、准确。 [关键词] 胃肿瘤；DNA 甲基化；聚合酶链反应；基因，肿瘤抑制；限制性内切酶图谱法 [中图分类号]R735．2 [文献标识码]A [文章编号]1672-6790(2010)02-0113-04 AppficationofcombiningM SPandCOBRA forthedetectionofmethylationoftumorsuppressorgeneingas- triccancer HUShi—lian ，CHENGZhao—dong ，SUN Yu—bei” XU Wei-ping ，SHEN Gan ，KONGXiang—yong。 ， (1．AnhuiProvincialHospital，a．DepartmentofGerontology，b．DepartmentofOncology，Hefei230001，China．2．Anhui Evidence—basedMedicineGenter) [Abstract] Objective ToinvestigatetheaccurationofdetectionforMethylationSpecificPCRintumorsup— pressorgene(TSG)ofcarcinomaspecimensfromgastriccancer．AndstudythesignificanceofcombineMSPandCO— BRA todetectthe methylation ofTSG in gast~ecancer．M ethods Firstly，MSP wasused todetectthepromoter methylationofRunx3geneofspecimensrfom gastriccnacer，thenweusedCOBRA toinvestigatethemethylation of Runx3genefrom thesamespecimens．Atlast，weanalyzetherelationshipbetweenMSPandCOBRA．Results The DNAmethylationoftheRunx3genewasofundin30ofthe54gastriccancersamples(55．6％)．Bycontrast，theposi— tiveratesofthesamesampleswas50．0％ (27／54)，whichd