抗辐射菌LexA蛋白对γ射线所致DNA链断裂影响.pdfVIP

第22 卷 第2 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol. 22, No.2 2004 年4 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. April 2004 抗辐射菌 LexA 蛋白对 γ 射线所致 DNA 链断裂的影响 刘芬菊 孙翠凤 陈 剑 宁 萍 （苏州大学放射医学与公共卫生学院 苏州 215007 ） 摘要 观察不同剂量γ射线、不同细胞数量和不同浓度的LexA 蛋白对DNA 链断裂与修复的影响。结果表明， 在 2—10Gy 范围内，照射剂量与 DNA 断裂程度之间存在良好的线性关系，r =0.881 ；当细胞浓度为（OD600 =0.4—0.6 ，相当于2×108 细胞/ mL ），细胞液体积为0.1—0.5mL 时，细胞DNA 含量与相对荧光强度成正相关； 结论抗辐射菌LexA 蛋白对γ射线所致细胞DNA 链断裂无明显的保护作用。 关键词 FADU ，LexA 蛋白，DNA 链断裂，60Co γ射线 中图分类号 R811.5 [1] 有研究资料证实 ，抗辐射菌(Dr)受照射后， 步骤见文献[3]。 细胞分裂生长立即停止，DNA 复制受阻。尽管辐 1.1.4 试剂 A 液（裂解液）1%NP-40，0.15mol / L 照引起的DNA 损伤本身会阻抑DNA 复制，但人 NaCl ，1mmol / L EDTA-Na ，50mmol / LTris，0.1% 2 们认为抗辐射菌(Dr) 的抗DNA 损伤能力主要表现 BSA ；B 液（变性液Ⅰ）0.45 体积裂解液溶于0.55 为抗致死和抗畸变两个方面。Dr 的抗辐射性并非 体积0.2mmol / L NaOH ；C 液（变性液Ⅱ）0.4 体积 由于其受照射后DNA 损伤程度较其他细菌轻，而 裂解液溶于0.6 体积0.2mmol/ L NaOH ；D 液（抗 是归于其令人惊奇的DNA 损伤修复能力。另有研 变性液）1mol / L 葡萄糖，14mmol / L 巯基乙醇；E 究表明[2] ，Dr 受特大剂量照射后，DNA 的损伤激 −1 液（荧光液）：1.0mg • L EB (Fluka Chemie AG)， 活RecA 蛋白，活性RecA 蛋白促进LexA 的自动 13.3 mmol / L NaOH。 降解，从而解除了LexA 对 SOS 操纵子的抑制。 1.1.5 主要实验仪器 CPS-1A 型超声波仪； 抗辐射菌的DNA 损伤修复是一个非常重要的生物 HITACHI650-60 荧光分光光度计。 过程，涉及到多种酶和蛋白质的参与。其中关键蛋 白质有哪些信号或调控系统起主导作用，是揭开其 1.2 实验步骤 独特高效的DNA 修复奥妙的关键。本工作的研究 1.2.1 大肠杆菌 大肠杆菌JM109 细胞生长在LB 培 重点是解决新发现的LexA 基因在损伤修复机制中 养基上，37℃振荡培养，当细胞浓度OD600=0.4—0.6 的作用，并对基因产物的生物功能进行测定和评 之间时，终止培养。收集大肠杆菌细胞，用0.02 mol 价，为其在生物医学领域的应用打下基础。 / L PB （pH=7.4 ）洗两次，再用PB 制成OD600=0.4 和0.8 的细胞悬液。 1 材料和方法