铜绿假单胞菌对环丙沙星的抗药性和耐药性机制研究.pdfVIP

　第４９卷　第６期 山　东　大　学　学　报　（医　学　版） ２０１１年６月　 　Ｖｏｌ．４９　 Ｎｏ．６　　　　　ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＳＨＡＮＤＯＮＧＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＨＥＡＬＴＨＳＣＩＥＮＣＥＳ）　　　 　 Ｊｕｎ．２０１１　 　文章编号：１６７１－７５５４（２０１１）０６－００３８－０８ 铜绿假单胞菌对环丙沙星的抗药性和 耐药性机制研究 １，２ ２ ２ ２ ２ ３ 高超 ，胡明 ，白华 ，齐静 ，朱小玲 ，刘昌彬 ， １ １ １，２ ３ 单虎 ，秦晓冰 ，刘玉庆 ，高培基 （１．青岛农业大学动物科技学院，山东 青岛２６６１０９； ２．山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，济南２５０１００； ３．山东大学微生物技术国家重点实验室，济南２５０１００） 摘要：目的　研究铜绿假单胞菌对环丙沙星的抗药性（ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）和耐药性（ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）机制，并予以区分。方法　 分离养殖场和医院铜绿假单胞菌３３株，用微量肉汤稀释法测定铜绿假单胞菌临床分离株对喹诺酮类抗生素的最 低抑菌浓度（ＭＩＣ），筛选喹诺酮抗药菌５株；体外连续培养诱导铜绿假单胞菌标准菌株 Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａＡＴＣＣ ２７８５３，得到对环丙沙星和头孢噻肟的高抗药性菌株ＰＡ３４。检测及分析铜绿假单胞菌喹诺酮耐药决定区（ＱＲＤＲ） 的基因突变；荧光比色法检测不同抗药性表型的铜绿假单胞菌外排泵活性；荧光定量ＲＴＰＣＲ法检测铜绿假单胞 菌外排泵、跨膜转运蛋白及喹诺酮靶酶编码基因的ｍＲＮＡ表达水平。结果　临床分离的５株喹诺酮抗药表型的 铜绿假单胞菌，其外排泵活性均显著高于标准菌株（Ｐ＜０．０１），外排泵、喹诺酮靶位酶编码基因的ｍＲＮＡ的表达 量上调、跨膜转运基因表达量下调，ＤＮＡ旋转酶Ａ亚基ｇｙｒＡ基因均发生点突变Ｔｈｒ８３ Ｉｌｅ。ＰＡ３４和这５株抗药 → 性菌株表现一致，但其ＭＩＣ远高于这５株抗药性菌株，主要由于ＰＡ３４除了ｇｙｒＡ基因发生点突变Ｔｈｒ８３ Ｉｌｅ外， → ｐａｒＣ基因发生多点突变Ｇｌｕ８４ Ｇｌｎ、Ｇｌｎ９１ Ｌｙｓ，且跨膜转运基因表达量极低。结论　在喹诺酮类抗生素选择 → → 压力下，铜绿假单胞菌能发展多种可能的机制以消除抗生素对细菌代谢的损伤，对类似ｇｙｒＡ、ｐａｒＣ基因突变称为 抗药性，其他生理性适应机制称为耐药性，其抗药性突变和耐药性调节共同决定了抗药性表型，但对其加以区分 并分别研究，更容易集中研究单纯的抗药性突变机制，采取相应的用药措施。 关键词：铜绿假单胞菌；喹诺酮；耐药性；抗药性 中图分类号：Ｑ９３１　　　文献标志码：Ａ ＲｅｓｉｓｔａｎｃｅａｎｄｔｏｌｅｒａｎｃｅｏｆＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａｔｏｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ １，２ ２ ２ ２ ２ ３ ＧＡＯＣｈａｏ ，ＨＵＭｉｎｇ，ＢＡＩＨｕａ，ＱＩＪｉｎｇ，ＺＨＵＸｉａｏｌｉｎｇ，ＬＩＵＣｈａｎｇｂｉｎ， １ １ ２ ３ ＳＨＡＮＨｕ，ＱｉｎＸｉａｏｂｉｎｇ，ＬＩＵＹｕｑｉｎｇ，ＧＡＯＰｅｉｊｉ