GDF9对猪卵丘细胞Bim蛋白的表达的调控机制与研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集 GDF9对猪卵丘细胞Bim蛋白表达的调控机制研究 王坤，王宪龙，赵栓，曾申明’ (中国农业大学动物科技学院农业部动物遗传育种与繁殖重点实验室，北京100193) 引言 Bim是Bcl-2家族中仅含有一个BH3结构域的蛋白，具有促凋亡活性。在猪的卵泡闭锁 过程中，颗粒细胞中Bim蛋白的表达起了重要的作用【l】；BimEL介导的卵丘细胞凋亡可以加 速卵母细胞老化【2l；而在卵泡发育过程中，卵母细胞可以通过分泌卵母细胞分泌因子来影响 其周围卵丘细胞的基因表达【3】o本研究旨在探究卵母细胞分泌因子GDF9对卵丘细胞内Bim 表达的调控机制。 材料与方法 抽取直径2-5ram的猪卵泡，体视镜下捡取卵丘卵母细胞复合体(COOs)，显微操作脱卵母 细胞，得到脱卵母的卵丘细胞复合体(oOX)；在培养液中添加不同浓度的GDF9培养OOX过夜， 检测卵丘细胞凋亡状况及Bim蛋白表达：利用多种细胞通路抑制剂筛选GDF9调控Bim表达的 细胞通路；GDF9处理后检测通路下游关键激酶的活性状态，并且结合RNAi技术，验证调控 Bim表达的路径；最后利用EMSA方法体外探究调节因子与bim启动子的结合情况。 结果 GDF9对卵丘细胞内Bim蛋白的表达具有显著抑制作用，同时也抑制了卵丘细胞的凋亡； 通路抑制剂筛选后发现，P13K通路参与了GDF9对Bim表达的调控；进一步研究发现，GDF9 的表达后，卵丘细胞内Bim的表达量显著升高。综上所述，卵母细胞分泌因子GDF9可以抑制 卵丘细胞的凋亡，这种作用可能是通过P13K／Akt／Fox03a通路调控Bim的表达来实现的。 讨论 在卵巢卵泡发育过程中，只有极少数的卵泡会发育到排卵，绝大部分只能闭锁退化。卵 泡颗粒细胞凋亡是启动卵泡闭锁的重要机制。卵丘细胞作为颗粒细胞的一种，包裹在卵母细 胞周围，可以与卵母细胞通过旁分泌或者缝隙连接进行物质能量交换和信息交流u。。本实验 中，GDF9可以显著抑制卵丘细胞的凋亡和Bim的表达，也证实了卵母细胞对卵丘细胞的调控 作用。但其他卵母细胞分泌因子，如BMPl5，对卵丘细胞的作用还需进一步研究。另外，探 索GDF9在抑制卵丘细胞凋亡中的其他靶蛋白也需进一步深入。 参考文献 X TanL Hormone Protein L，WuY B，et 【l】Wang a1．Follicle—stimulatingRegulatesPro-apoptotic MediatorofCellDeath—Extra PorcineGranulosaCell Bcl一2一interacting Long(BimEL)-induced Apoptosis．JBi01．Chem．，2012．287：10166-10177． X J a1．BIMEL·mediatedincumuluscellscontributesto 【2】WuYWangL，LiuH，et apoptosis in a via 11． degenerativechangesagedporcineoocytes paracrine 76：1487·1495． R Mand JG ofcumuluscell 【3】GilchristB，Lane ThompsonOocyte-secretedfactors：regulators functionand oocytequality．Hum．Reprod．Update．，2008．14：159-177． GiichristR L D cellinteractionsfollicle B，Ritter 【4】4 J，ArmstrongT．Oocyte—somatic