棕榈酸对MC3T3-E1成骨细胞凋亡的作用和机制与研究.pdfVIP

棕榈酸对MC3T3一E1成骨细奠凋亡的作用和机制研究 钟兴潘天荣杜益君· 安徽医科大学第二附属医院内分泌科安徽台煺 目的：棕榈酸诱导Mc3T3一El成骨细胞的凋亡是否与NF—KB的激活有关。 h后细胞活力和细胞凋亡 方法：观察不同浓度(o～1000斗M)棕榈酸孵育MC3．I3一E1成骨细胞24 blot检测cleaved 的影响。细胞活力用MTT法检测，细胞凋亡用Hochest33258染核和westemc鹪p嬲e一3 K B lllin，Westemblot检测I 蛋白验证。用500斗M棕榈酸分别孵育细胞O～240 B仅、p—NF—Kp65 蛋白表达。 结果：1、观察棕榈酸对Mc3T3一E1细胞毒性的影响，将不同浓度的棕榈酸孵育细胞24h或500p M棕榈酸孵育12～48 细胞24 h，12h细胞活力开始下降(Po．05)，24 用500斗M棕榈酸孵育12～48 h下降为对照组54％(P h，首先用 c鹊p鹪e一3活性检测细胞凋亡。本研究将500斗M棕榈酸分别孵育0、6、12、18和24 Hochest33258染核观察，正常对照组细胞的染色质均匀分散于细胞核内，呈均一淡蓝着色，核内结 构清楚，核膜光滑，染色质分布均匀。棕榈酸处理组可见部分细胞的染色质出现典型凋亡改变，随 着棕榈酸浓度的升高凋亡细胞数目明显增多，凋亡细胞呈不均一的高亮蓝着色，胞核缩小，核膜皱 缩，染色质呈边缘化、聚集、皱缩、断裂，晚期染色质碎裂。再用westemblot法检测cleavedcasDase一3 而cleaved NF—K B信号通路作用，500斗M棕榈酸在不同时间点(o、30、60、120和240min)处理Mc3T3一E1 B B KB 细胞，提取全细胞蛋白裂解物，检测p—NF—Kp65、NF—Kp65和Id和tubulin等蛋白的表达。 B 棕榈酸处理后p-NF—Kp65水平60min开始升高，在120min时达到高峰增加2．96倍(Po．05)， B 随后开始下降。在整个细胞处理过程中NF—Kp65表达没有明显的变化(Po．05)。棕榈酸处理后 IKB仅表达水平逐渐下降，以120 K B Mc3T3一E1细胞后，IB仅降解，NF—K p65激活。4、为了进一步验证NF_KB信号通路是否参与 棕榈酸诱导成骨细胞凋亡，实验先用NF—KB抑制剂PDTC预孵Mc3T3一El细胞1h，再加棕榈酸孵 育24h，用Westemblot方法检测cleaved PDTC能 caspase一3和casp鹊e一3蛋白的变化。10和20肛M B vs vs 1．39±o．12，1．76±0．14 显著抑制棕榈酸诱导的p—NF—Kp65蛋白水平升高(1．76±o．14 1．25±0．10，P0．05)。与对照组相比，PDTc组的cleaved 一234— 显改变；500斗M棕榈酸组的cleave