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蛋白酶解及质谱鉴定完整操作流程
仪器：
ABI 4800 MALDI-TOF/TOF 串联质谱仪(ABI)、真空冷冻干燥机、水浴锅、
Mascot 分析软件、移液器、离心管
主要溶液配置：
考染脱色液：25mmol/L NH HCO 、50%乙腈的水溶液
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银染脱色液：15mM K Fe(CN) 、50mM NaS O 的水溶液
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脱水液 1：50%的乙腈溶液
脱水液 2 ：100%的乙腈
吸胀液：25mmol/L NH HCO 的水溶液
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酶解覆盖液：25mM的NH HCO 、10%乙腈的水溶液
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酶解工作液：含 0.02ug/ul 胰蛋白酶的酶解覆盖液
蛋白萃取液：含5% TFA、67%乙腈的水溶液
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蛋白点切取：
一、实验操作：
1、将 0.2ml 的枪头前端剪去0.5cm，以增大孔径，
2 、将枪头垂直戳向凝胶上的蛋白点，旋转枪头直至将胶点取下，
3、将取好的胶粒转入装有去离子水的 0.5ml 离心管里，用枪头反复吸打溶
液至枪头内胶粒进入离心管，
4 、吸干去离子水后封盖保存并做好标记。
二、注意事项：
1、离心管最好用进口离心管，以免塑料污染；水最好用去离子水，
2 、取点时带好口罩与手套以及头套，以免皮屑等角蛋白的污染，
3、蛋白鉴定需要的蛋白量越多越好，所以尽可能把某一个点里所有的蛋白
全部取到，不过某些比较大的点就只要取一部分就可以了，
4 、针对特别小的蛋白点，枪头孔径可能会比蛋白点面积大，取点时把该蛋
白点的边上空白部分也一起取一些下来也不要紧，
5、蛋白点的纯度越高越容易鉴定，一般双向电泳的点都是独立的蛋白，纯
度完全满足鉴定的要求，针对有部分交叉的蛋白点，取点时注意不要取混，混
合的蛋白点增加质谱鉴定的难度，降低鉴定成功率，
6、取完的蛋白点可以放在室温下保存 1 周左右，可以放在-20 度或者-80
度保存半年以上，
7、只有胶图上清晰可见的蛋白点，其含量就足够用于质谱鉴定，所以只要
取一次蛋白点就可以了，不需要把几张胶上的蛋白点取了放在一起进行鉴定，
同时注意不要把胶点弄得太碎
8、条件允许的话可以多取一次胶点的重复以做好备份。
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蛋白质酶解：
一、考马斯亮兰染色蛋白点的酶解：参考[Katayama H., Nagasu T., Oda Y.,
Improvement of in-gel digestion protocol for peptide mass fingerprinting by
matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, Rapid
Communications in Mass Spectrometry, 15, 1416 - 1421]的方法进行
1、将切取的蛋白胶点转入0.5ml进口离心管中，采用超纯水漂洗两次，
2 、加入考染脱色液，脱色30min，
3、吸出脱色液，加入脱水液1，脱水30min，
4 、吸出脱水液1，加入脱水液2 ，脱水30min，
5、吸出脱水液2 ，加入10ul酶解工作液，吸胀30min，
6、加入20ul酶解覆盖液，37℃水浴酶解过夜，
7 、酶解后上清转移至另一新离心管中，
8、加入50ul蛋白萃取液于剩下的胶中，37℃温浴30min，5000g离心5min，
合并上清，冻干后待做质谱。
二、硝酸银染色蛋白质酶解：
1、将切取的蛋白胶点转入 0.5ml 进口离
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