儿童急性呼吸道感染的常见病毒及病原诊断【荐】.pdfVIP

儿童急性呼吸道感染的常见病毒及病原诊断 首都儿科研究所 朱汝南 大家好！今天讲课的内容是儿童急性呼吸道感染的常见病毒及病原诊断。 儿童每年一般要经历6 — 9次上呼吸道感染，青少年和成人则每年经历2 — 4次上呼吸感染，而约 1/3儿童在1岁之前都要经历至少1次的下呼吸道感染。 下面首先介绍一下儿童急性呼吸道感染常见的病毒病原。首先介绍正粘病毒科，大家比较熟悉的就是 甲型流感病毒和乙型流感病毒，而感染人类的又包括甲1型和甲3型。乙型分为两个系，Yamagata系和 Victoria系。另外还有大家比较熟悉的副粘病毒科的一些病毒，包括副流感病毒1、2、3、4型，呼吸道合 胞病毒A、B亚型，人偏肺病毒A基因型和B基因型，以及麻疹病毒和腮腺炎病毒。 另外还有小核糖核酸病毒科，包括鼻病毒和肠道病毒，腺病毒科的腺病毒，以及5种冠状病毒，另外 还有细小病毒科的人Boca病毒。 这几张图都显示了进行呼吸道病毒病原检测的一个结果，可以看到在下面这张图中阴性结果的还是占 到比较大的比例。那么病毒检测为阴性它受到一些因素的影响，首先一个是样本的类型你要采集合适，还 有你样本的采集时间应该在急性期采集。另外跟患者的年龄有关，还有你检测方法，它检测的靶抗原，以 及病毒的性质都会影响到病毒检测的结果。那么病毒检测如果为阴性，它有可能是病毒是新的，没有发现 的一些病毒，我们做了抗原检测呀、核酸检测等等都没有检测到，它有可能是其他一些没有发现的病毒。 另外还有可能就是标本中病毒载量比较低，你的检测方法敏感性达不到。另外还有标本中含有一些病毒抑 制因子影响了你的这种检测方法的结果。还有最关键的一点，能够得到就是正确的病毒检测的结果，首先 最关键的一个是标本的采集，以及它的处理是否得当。 另外大家知道常见的这个病毒病原的诊断方法，一个就是检测抗原，一个是检测抗体这两种类型。那 么经典的病毒学方法，像病毒分离进行细胞培养，另外可以用电镜直接在镜下检测病毒颗粒，可以观察到 病毒颗粒。另外还有酶免疫技术，另外像流感病毒的神经氨酸酶活性实验，还有咱们一般常用的免疫荧光 技术，另外还有一些光学免疫技术。那么目前比较常见应用到的方法还有分子病毒学方法，它包括了核酸 分子杂交、PCS或者RT-PCR，以及病原体诊断的基因芯片等。 下面再介绍几种比较新的一些技术，像PCC-EIA技术，那么就是PCR扩增产物与生物素标记的RNA或DNA 探针杂交后，通过辣根过氧化物酶标记的链酶亲和素的酶免反应来进行显色，这是一个就是二级放大信 号。另外还有多重PCR技术，那么它就是在同一PCR反应体系中加入两对以上的特异性引物，可以同时扩增 出多个核酸片断，通过不同的检测方法来判断这个标本中的病毒，那么已有的商品化试剂盒，包括 Luminex Molecular公司的xTAG RVP方法，以及还有快进的有一个ResPlex II 方法， assay (Qiagen) ， 另外还有一些那个韩国的一个 MassTag 公司也有一些多重PCS技术。另外目前大家很常用的就是这个Real time-PCR技术，它的就是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信息积累实时监测整个PCR进程，它可 以进行定性分析，或者通过标准曲线来对位置模板进行定量分析。那么它可以通过标记不同的荧光基团， 来进行多重的Real time- PCR，这样它就可以同时检测多种病原，即节省了这个病原，就是标本的用量， 又可以节省时间。 1 那么进行急性呼吸道病毒感染的病原诊断，可以送检的临床标本包括呼吸道标本和血液标本，那么呼 吸道标本我们可以从咽拭子、鼻拭子和鼻咽吸出物，根据检测方法的不同来取样。那么这些标本可以进行 组织培养、免疫荧光试验、酶免疫试验以及核酸试验。血液标本我们可以，急性期的血液我们可以进行急 性期IgM抗体的检测。另外还可以采集急性期和恢复期血液血清进行双份IgG抗体升高的检测。下面有两种 就是可以进行急性期呼吸道病毒的急性期IgM抗体检测的试剂盒，一种就是西班牙研发、安图生物代理的 “ 九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒 ” ，以及欧美医学诊断技术有限公司生产的一个呼吸道病 原的一个，一个马赛克的这种，就是来检测基因IgM抗体的一个世纪和。 下面介绍一下呼吸道标本的处理流程。首先采样以后要进行振荡混匀。我们的采样液中一般包括双