大鼠脑微血管内皮细胞和星形胶质细胞共培养血脑屏障体外模型的建立.pdfVIP

维普资讯 2005年4月第22卷第2期 天 津 中 医 药 Apr．2005．Vo1．22 No．2大共 删TianjinJournalofTraditionalChineseMedicine 149 鼠脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞 培养血脑屏障体外模型的建立掌 民，范 祥，张艳军，张伯礼，梅建勋，高秀梅 中医学院，天津 300193) 摘要：【目的】建立大鼠脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养血脑屏障体外模型。方【法】采用原代培养脑微 血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养方法建立血脑屏障体外模型。结【果】星形胶质细胞与脑微血管内皮细胞共培养 可提高血脑屏障特异性酶—— 一谷胺酰胺转肽酶、碱性磷酸酶的表达，提高脑微血管内皮细胞跨细胞间电阻。结【论】 成功建立脑微血管内皮细胞与星形胶质细胞共培养血脑屏障体外模型，而且较单层内皮细胞模型更接近在体状态。 关键词：血脑屏障；共培养技术；体外模型；脑微血管内皮细胞；星形胶质细胞 中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：1671-1519(2005)02-0149-03 血脑屏障(Blood—BrainBarrier，BBB)由排列在 ma)，青霉素、链霉素、肝素(市售分析纯)，兔抗人第 脑微血管上的内皮细胞构成，内皮细胞外侧的周细 Ⅷ因子相关抗原和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、紧密 胞、基膜以及星形胶质细胞的足突也参与了血脑屏 连接蛋白(zo一1)、多克隆抗体 (美国Zymed公司)， 障的形成，其中微血管内皮细胞之间的紧密连接 SP免疫组化试剂盒(JL京中山生物试剂公司)。^y一谷 (tightiunction，TJ)是形成血脑屏障重要的物质基 氨酰胺转肽酶 (-y—GT)和碱性磷酸酶 (ALP)检测试 础。研究药物对血脑屏障的影响，药物转运机制，对 剂盒(JL京中生生物工程高技术公司)，BCA微量蛋 药物筛选、药效研究，寻找有效的促进药物透过血 白定量试剂盒 (美国Pierce公司)。细胞共培养池 脑屏障方法等均有重要意义。中医药在防治脑血管 (CellCultureInsert，12wellformat、1m孔径 ，BD 病方面有突出效果，但很多药物作用原理不明，在 公司)。 中枢神经系统的作用途径、靶点及配伍意义均缺乏 1．2 BMEC的培养 取 1月龄Wistar大鼠2只，颈 深入研究，影响了药物开发。中药及其化学成分在 椎脱 臼处死，75％乙醇消毒 3min，无菌条件下迅速 中枢神经系统的动力学及代谢方面变化研究，也亟 取脑置于冷D—Hanks平衡盐溶液，取皮质并剥离脑 需有力工具支持，但在体条件下影响因素非常复 膜及大血管，冷DMEM培养基冲洗皮质，剪成 1mill3 杂，难以进行深入研究。 大小，1000r／min，离心 10min，加入 0．2％II型胶原 本研究应用 同种属动物原代培养脑微血管内 酶，37℃空气浴震荡消化 20min，玻璃匀浆器上下匀 皮细胞(BMEC)与星形胶质细胞(AC)共培养的方式 浆 5次，直接加入 0．1％胰蛋白酶和0．1％EDTA混 建立血脑屏障体外模型，为研究药物对BBB的影响 和液，37℃空气浴震荡消化 5min，含 10％FBS的 及药物透过机制提供有力工具。 DMEM培养基终止消化，75 m筛网过滤，收集滤液， 1 材料与方法 1000r／min，离心 10min，再用含 1O％FBS的DMEM 1．1 材料 Wistar大鼠、乳 鼠由天津 中医学院实验 培养基 5mL重悬静置 3min，将细胞悬液加入到 动物中心提供。DMEM培养基(Gibco公司)、胎牛血 25％Pereol液上层，2500r／min