蛋白质组学研究技术和其应用.pdfVIP

2009 率 第 12 潮 科研探索。 蛋白质组学研究技术及其应用 林 武 人类基因组计划(HGP)全基因组测序的完成， 标志 丰度蛋 白的检出十分有利 。 着后基因组时代的来临。基于基因组学本身的局限性，它 2．1．2质谱分析 不能回答诸如蛋白质的表达水平和表达时间、翻译后修 质谱 (Ms)的基本原理是在样品离子化后，根据不同离 饰、蛋白质和蛋白质分子或其他生物分子的相互作用等问 子其质荷 比的不同进行分离并确定分子量。以前的质谱 由 题。蛋白质组proteome)概念的提H{，使研究人员 蛋 白质 于难以解决高分子化合物的离子化问题而仅限于分析小 组学fproteomics)：~_个全新的领域来考虑生命活动的规律。 分子化合物，直到基质辅助的激光解吸电离和电喷雾电离 1蛋白质组学的概念与特点 这两种新的电离技术的出现，才使质谱广泛用于蛋白质的 迄今为止．虽然基 组计划能确定某生物基凼组 内的 鉴定，并已成为蛋白质组学研究的支撑技术。近年来质谱 全部基因，但仍不能告诉人们哪些基因在何时何地以何种 的装置和技术不断完善发展。比如可以不再经过胶分离和 程度表达。因此需要对蛋白质的表达和功能作进一步研 酶解而直接用质谱鉴定蛋白质，用蛋 白质粗提物先进行毛 究。1994年Wilkins和Williams等首次提出了蛋 白质组的 细管电泳分离，然后直接加至傅立叶离子回旋加速器核磁 概念。蛋 白质组学主要研究细胞内所有蛋 白质在生命过程 共振质谱仪，一次就能获得多个蛋白的精确分子量。另一 中的表达、蛋 白质之间的相互作用、翻译后的各种修饰等。 种 MALD I四极杆飞行时间质谱，即把 MALDl离子源与 与基因组不同的是，蛋 白质组并不是静止的，会 为基因结 一 个高效串联质谱仪相连，并结合肽质指纹图和肽序列标 构的变化以及环境的刺激不断的发生变化。另外，许多蛋 签对蛋 白质进行鉴定，可大大提高鉴定的特异性和准确 白质还要进行翻译后修饰，如糖基化和磷酸化等，都会造成 率。此外又出现了把两个飞行时间质量分析器串联在一起 它们的波动性。虽然蛋白质的可变性和多样性等导致了蛋 的MAL—DI—TOF—TOF质谱，它具有 MALD I-Q—TOF的许 白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多，然而正 多优点，使质谱真正发展为高通量的蛋白质测序工具。 是由于这些特性的参与，影响着整个生命过程。虽然人类 2．1．3ICAT技术 对于蛋白质的研究已逾百年，但已往人们只是针对生命活 ICAT技术 目前已成为蛋 白组研究的核心技术之一。 动中某一种或某几种蛋白质，这样就难以系统透彻地阐明 它是在质谱技术的基础上发展起来的一种定量质谱法，能 和解释生命活动的基本机制。因此，大规模、全方位的蛋白 够精确地分析不同样品中蛋白质表达量的差异，从而使蛋 质研究势在必行 。 白质组学真正成为一种差异显示技术。此技术是用具有不 2蛋 白质组学研究常用技术 同质量的小分子试剂 ICAT去标记处于不同状态下的细胞 2．1蛋 白质分离和鉴定技术 中的蛋白质，再利用串联质谱技术，就能非常准确地比较出 2．1．1双向凝胶 电泳 两份样品中蛋 白质表达水平的不同。ICAT技术的优点在 双向凝胶 电泳 f2一dimentionalgelelectrophoresis) 于它可以对混合样品进行直接测试而不需分离，能够迅速 是 目前蛋 白质组学研究的核心技术，其原理简明，先进行 地定性和定量鉴定低丰度蛋 白质，故